химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

лиметров и ширины стартовой зоны больше, чем на несколько сантиметров.

6. Растворители. В литературе описано очень много самых разных растворителей, используемых для качественного и полуколичественного анализа, а также длямикгюпрепаративных целей. Здесь мы приводим только, те из них, которые можно успешно применять во многих случаях.

Бутанол — вода — уксусная кислота (120:50:30) (по объему; гомогенная система, не требующая уравновешивающего раствора)

С равным успехом этот растворитель можно использовать при качественном и полуколичественном анализе аминокислот, при микропрепаративном разделении и при получении пептидных карт. Свежеприготовленный растворитель можно использовать немедленно; его не следует хранить свыше 10—12 дней, так как по истечении этого срока происходит этери-фикация.

Изоамиловый спирт — пиридин — вода (35:35:30) (по объему; гомогенная система, не требующая уравновешивающего раствора)

Вначале смешивают изоамиловый спирт с пиридином и к этой смеси по каплям при постоянном перемешивании добавляют воду. Если полученный раствор опалесцирует, его следует профильтровать. Опалесценция вновь появляется через 8—10 дней и тогда растворитель становится негодным для использования. Это одна из лучших смесей для получения пептидных карт и микропрепаративных хроматограмм.

Приведенные ниже растворители можно использовать при комбинации электрофоретического и хроматографического разделения исследуемого материала: бутанол—пиридин—уксусная кислота — вода (60 ; 40 : 12:48); вода, насыщенная фенолом, в атмосфере NH3; втор-бутиловый спирт — 3%-ный раствор аммиака (3 : 1); м-кре-зол — фенол, насыщенный водой (1 : 1); изобутанол—вода—муравьиная кислота (695 : 295 : 10); изобутанол—метилэтилкетон — вода (40 : 30 : 20); н-пропанол—вода (70 : 30); этанол—вода (77 : : 23).

7. Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. Л. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими a-NH2-rpуппу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хроматограмм весьма удобен так называемый кадмий-нингидрин, реакция которого с аминокислотами довольно чувствительна и приводит к развитию стойкой красной окраски, а также коллидин-нингидрин, реагирующий с некоторыми аминокислотами избирательно и позволяющий дифференцировать их по цвету пятна.

1) Приготовление кадмий-нингидрина. 1,0 г нингидрина растворяют в 100 мл ацетона. 100 мл ацетата кадмия растворяют в 10 мл

дистиллированной воды и прибавляют 5 мл уксусной кислоты.

Оба полученных раствора объединяют и хранят в склянке из темного стекла.

Высушенную хроматограмму проводят через приготовленный раствор красителя, налитый в плоскую кювету, и высушивают на воздухе в темноте. При комнатной температуре максимальное окрашивание развивается приблизительно через 2 ч.

2) Приготовление коллидин-нингидрина. 5,0 г нингидрина

растворяют в 955 мл ацетона, затем добавляют 25 мл уксусной кислоты и 20 мл коллидина.

Б. Определение гистидина при помощи реакции Паули.

1) Приготовление реактива Паули. Раствор I: 50,0 г сульфаниловой кислоты растворяют в 250 мл 10%-ного раствора КОН и добавляют 200 мл 10%-ного раствора NaN02. Раствор II: к 80 мл концентрированной НС1 прибавляют 40 мл дистиллированной воды.

К охлажденному до 0°С раствору И по каплям при охлаждении и постоянном перемешивании прибавляют раствор I. Выпадающий при этом осадок отфильтровывают и высушивают при комнатной температуре.

2) 0,1 г реактива Паули растворяют в 100 мл 20%-ного раствора

Na2C03 и свежеприготовленным раствором опрыскивают хроматограмму. Чтобы водно-щелочной раствор не размывал пятен

и зон на хроматограмме, следует добиться тонкодисперсного распыления реактива и равномерного опрыскивания. Пептиды, содержащие гистидин, и свободный гистидин дают красное окрашивание на

желтом фоне. Пептиды, содержащие тирозин, и свободный тирозин

дают фиолетовое или серо-голубое окрашивание, но их пятна в

отличие от пятен, содержащих гистидин, быстро бледнеют.

В. Определение аргинина и пептидов, содержащих аргинин, в реакции Сакагуши. Раствор I: 0,01%-ный а-нафтол в 95%-ном этаноле, содержащем 5% мочевины. Раствор II: 2,0 г брома в 100 мл 8%-ного раствора NaOH. Перед использованием к раствору I добавляют несколько гранул NaOH и после их растворения реактивом опрыскивают хроматограмму. Затем бумагу высушивают и опрыскивают раствором II. Аргинин и пептиды, содержащие аргинин, окрашиваются в красный цвет.

Г. Определение пролина и оксипролина. 100 мг изатина растворяют в 50 мл бутанола и прибавляют 5 мл уксусной кислоты. Проявляемую хроматограмму опрыскивают этим раствором и

высушивают при 40°С в течение 5 мин. Пролин и пептиды, содержащие пролин в N-концевом положении, дают интенсивное голубое окрашивание. Фенилаланин и тирозин при этом окрашиваются в зеленовато-голубой цвет, что является помехой при оп

страница 78
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ремонт холодильника beko
заказ автобусов в москве до 30 мест
медсправки для замены водительского удостоверения юзао
снимали панель тойоты остались мятины

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.07.2017)