химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

но нанести на хроматографическую бумагу микропипеткой, градуированным капилляром или с помощью так называемого метода полиэтиленовой пленки.

При полуколичественном анализе на хроматографическую бумагу необходимо наносить точно известный объем исследуемого раствора. Проще всего и наиболее точно это можно сделать с помощью микропипетки. В продаже имеются микропипетки нескольких типов с постоянным или произвольно задаваемым объемом. В связи с тем что фабрично изготовленные микропипетки довольно дороги, неследователи4 часто пользуются самодельными капиллярами, которые можно приготовить следующим образом.

Из расплавленных на огне стеклянных трубок или пробирок вытягивают тонкие капилляры длиной около 12 см и производят их калибровку на 0,05 или 0,01 мл. Обезжиренные и хорошо высушенные капилляры калибруют с помощью градуированной микропипетки на 0,1 мл. Для этого из микропипетки в капилляр переносят точно 0,05 или 0,01 мл воды и на стенке капилляра карандашом по стеклу или цветной пастой отмечают положение мениска. Обладая некоторым опытом, можно довольно точно произвести эту калибровку. Важно проследить, чтобы конец пипетки был достаточно чистым, сам капилляр — обезжиренным и чтобы во время переноса воды и капилляр, и микропипетка находились в горизонтальном положении.

При своеобразном способе нанесения исследуемого материала на хроматографическую бумагу с помощью полиэтиленовой пленки дном нагретой на пламени стеклянной пробирки в пленке делают несколько углублений, в которые вносят примерно по 0,05 мл исследуемого материала, например кислотного гидролизата белка. На одной пленке можно разместить 3—5 проб (фиг. 39). Очень осторожно, остерегаясь размазать капли, пленку переносят для высушивания в вакуумный эксикатор. Примерно через 10—15 мин, когда капли подсохнут, пленку извлекают и на край каждого высохшего пятна наносят маленькую каплю воды заостренным концом стеклянной палочки, с помощью которой растворяют весь материал в этой капле. Лист хроматографической бумаги кладут на чистое стекло и отмечают карандашом места нанесения матери ала. Затем к этому участку бумаги прикладывают полиэтиленовую пленку с исследуемым материалом и с обратной стороны прижимают ее к бумаге пальцем. Если при этом площадь смоченной бумаги будет не больше 1 см2, то в результате хроматографии исследуемый материал распределится небольшими пятнами правильной формы. Этот метод нанесения обладает большими преимуществами: в течение нескольких минут можно без потерь нанести 20—30 образцов. При этом отпадает необходимость готовить и мыть капилляры, применять при нанесении высушивание горячим воздухом и т. д.

5. Микропрепаративная хроматография. Подлежащий фракционированию материал наносят на бумагу Ватман 3 или Ватман 3 ММ вдоль стартовой линии, длина которой не должна превышать 20 см. Максимально можно наносить 3—4 мг на 10 см. По окончании хроматографии хроматограмму высушивают, отрезают с обеих сторон полоски бумаги шириной 0,5 см и окрашивают их для того, чтобы установить положение зон, которые должны быть элюирова-ны (см. фиг. 17); затем вырезают эти зоны и элюируют фракции.

Фиг. 40. Элюирование компонентов из фильтровальной бумаги малыми объемами растворителя с помощью капилляра (подробное объяснение см. в тексте).

Для элюирования один конец вырезанного участка зажимают между двумя стеклянными пластинками, погруженными в кювету с дистиллированной водой, и, когда вся бумага увлажнится, к нижнему заостренному концу подводят закрепленный пластилином капилляр. Элюат начинает медленно поступать в капилляр (фиг. 40). Если длина капилляра равна 30 см, то заполняющий его объем жидкости вполне достаточен для элюирования полоски хромато-граммы, имеющей размер 1x8 см. Из капилляра элюат переносят в маленький бюкс на 2—3 мл для высушивания в вакуумном эксикаторе.

Независимо от избранного способа нанесения образца Jc использованием микропипетки, капилляра или полиэтиленовой пленки) исследуемый материал должен быть как можно более концентрированным и распределяться на минимальной площади. При слишком большом диаметре стартового пятна или при слишком широкой зоне нанесения материала на одномерной препаративной хроматограмме довольно трудно получить хорошее разделение, так как при этом фракции будут давать большие пятна и зоны, а расположенные рядом компоненты могут перекрывать друг друга. Идеаль-, ным было бы нанесение образца в виде точки. Это, конечно, вряд ли возможно, но, если стартовое пятно в диаметре не превышает 5—6 мм, а стартовая зона не шире 2—3 см, получаются вполне четкие хроматограммы. Очень часто при нанесении трудно обойтись без специальных приспособлений, таких, например^ как столик для нанесения образцов! имеющийся в продаже. Для подсушивания проб при нанесении проще всего использовать обыкновенный фен для сушки волос. Горячий воздух, направляемый на бумагу, быстро высушивает содержащуюся в нанесенном материале воду. Это позволяет повторять нанесение, не увеличивая диаметра стартового пятна больше, чем на несколько мил

страница 77
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
московский центр обучения холодильщиков
электропривод клапана siemens gma 321.1e
стоимость проката авто мерседес спринтер
2маши билеты

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.05.2017)