химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

Patterson J. A., Anal. Biochem., 18, 228(1967).

2. Devenyi Т., Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung., 3, 429 (1968).

3. Devenyi Г., Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung., 4, 297 (1969).

4. Devenyi Т., Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung., 6, 129 (1971).

5. Spackman D. Stein W. Я., Moore S., Anal. Chem., 30, 1181 (1958).

ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ И ПЕПТИДОВ НА БУМАГЕ

Принцип метода. Благодаря различиям в коэффициентах распределения аминокислоты и пептиды можно разделить с помощью насыщенных водой органических растворителей на фильтровальной бумаге в закрытой камере соответствующей формы и размеров.

Область применения. Качественное и полуколичественное определение аминокислот, получение пептидных карт (метод отпечатков пальцев), микропрепаративное разделение и очистка пептидов.

МЕТОДИКА

/. Хроматографическая камера. Для восходящей хроматографии, при которой фронт растворителя движется вверх по бумаге, можно использовать стеклянный цилиндр подходящего размера. Максимальные размеры листа бумаги примерно 45 х 50 см, поэтому высота такого цилиндра должна быть немного больше 50 см. Лист бумаги сворачивают в повторяющий форму цилиндра рулон. Для сохранения этой формы два конца листа сшивают нейлоновой нитью. Обычно диаметр рулона не превышает 12—15 см. При таких размерах в одном и том же стеклянном цилиндре можно либо провести анализ материала методом «отпечатков пальцев», либо получить одномерные хроматограммы 8—10 разных образцов одновременно.

Нанеся на края цилиндра слой вакуумной смазки, его закрывают стеклянной пластинкой, которую сверху придавливают каким-нибудь грузом, например заполненной жидкостью бутылью. В таком герметично закрытом цилиндре удается создать атмосферу равномерно насыщенных паров растворителя. Она поддерживается за счет испарения жидкости, налитой в 50-миллилитровый сосуд, который ставят на дно цилиндра внутрь рулона. Следует позаботиться о том, чтобы бумага не касалась ни стенок цилиндра, ни краев сосуда с уравновешивающей жидкостью, иначе в местах контакта фронт растворителя изменит скорость своего движения.

Для одновременного получения нескольких хроматограмм в одинаковых условиях более пригодна прямоугольная камера, которую можно использовать как для восходящей, так и для нисходящей хроматографии. В качестве такой камеры можно использовать, например, деревянный ящик со стеклянными стенками размером 70 х 70 х 70 см, по верхнему краю которого прикреплена полоска пористой резины. Сверху эту камеру накрывают толстым (тяжелым) стеклом, обеспечивающим герметичность системы. При восходящей хроматографии нижний край фильтровальной бумаги зажимают между двумя стеклянными палочками, погруженными в одну из стеклянных кювет, которые размещают на дне камеры. Для нисходящей хроматографии необходимы пластмассовые или стеклянные кюветы. Верхний край фильтровальной бумаги погружают в такую кювету, расположенную в верхней части камеры, и закрепляют там с помощью тяжелой стеклянной палочки.

В продаже имеются хроматографические камеры подобной конструкции, которые можно использовать для самых разнообразных целей.

• 2. Выбор фильтровальной бумаги. Для качественного и полуколичественного хроматографического анализа обычно используют бумагу Шляйхер-Шуль 20436 и Ватман 1. Микропрепаративное выделение пептидов лучше всего проводить на бумаге Ватман 3 и Ватман 3 ММ. Наиболее четкая картина пептидных карт получается на бумаге Ватман 3 ММ.

При микропрепаративном выделении следует обратить особое внимание на способ элюирования фракций. Бумага Ватман позволяет проводить элюирование дистиллированной водой, поэтому фон в измеряемых пробах довольно низкий. В то же время элюирование фракций при хроматографии на бумаге Шляйхер-Шуль можно проводить только разбавленным раствором уксусной кислоты, что приводит к весьма высокому фону.

3. Стандартные растворы аминокислот. При качественной и пол у количествен ной хроматографии аминокислот используют два стандартных раствора, состав которых приведен в табл. 9. Из-за

Фиг. 38. Расположение аминокислот на бумаге при нисходящей хроматографии в бутанольной

системе.

А и Б — смеси аминокислот; Я — нейтральный красный; / — Цис S03H; 2 — Гис; 3 — Асп; 4—Тля; 5 — Тре; 6 — Про; 7 —Феи; 8 — Лиз; 0 — Apr; 10 — Мет S02; Л — Сер; 12 — Глу; 13 — Ала; 14 — Тир; 15 — Вал; 16 — Лей.

нестабильности цистеина, цистина и метионина вместо них в состав стандартных растворов входят окисленные производные, т. е. цистеиновая кислота и метионинсульфон.

Относительное расположение различных аминокислот при хроматографии стандартных аминокислотных смесей показано на хроматограмме, представленной на фиг. 38. В пятне, обозначенном буквой Н, содержится нейтральный красный. Этот индикатор имеет идентичную с лейцином величину Rfi и поэтому по нему можно следить, когда наиболее быстро мигрирующий компонент стандартной смеси—лейцин—достигнет нижнего края хроматограммы при нисходящей хроматографии.

4. Нанесение исследуемого образца. Исследуемый образец мож

страница 76
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
macbook аренда
Рекомендуем фирму Ренесанс - модульные лестницы в леруа мерлен - доставка, монтаж.
кресло офисное престиж купить
Выгодное предложение от интернет-магазина KNSneva.ru на Asus N552VW с доставкой по Санкт-Петербургу

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)