химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ость анализа Давление буферного раствора^при 55°С

100 мл/ч 50 мл/ч 180—190 мин

30—35 атм для раствора А, 25—28 атм для раствора Д, 20—22 атм для раствора Е

Примечания. В этом случае регенерация не обязательна. Обработку щелочью проводят способом, описанным выше.

При определении кислых и нейтральных аминокислот двухколоночным методом прибору задается такая же программа, как и при одноколоночном методе, но анализ останавливают после того, как выходит пик фенилаланина.

С растворами Г и Д такой анализ проводят в течение 2 ч. Если применяют классическую методику с использованием раствора Б, это время возрастает до 3 ч, поэтому последний вариант метода вряд ли оправдан.

После анализа колонку следует регенерировать 0,2 н. NaOH й отмыть стартовым буферным раствором (А).

Определение основных аминокислот на малой колонке [5]

Высота столбика смолы в колонке 8—10 см

Буферный раствор В

Скорость протекания буферного раствора 68 мл/ч

Скорость протекания нингидрина 34 мл/ч

Давление буферного раствора при 55°С 4—8 атм

Продолжительность анализа около 80 мин

Примечания. Продолжительность анализа зависит от высоты смолы в колонке. Регенерация необходима только после 10—15 анализов.

Быстрое определение метионина и лизина [4]

Высота смолы в колонке 14 см

Буферные растворы А и Г

Скорость протекания буферного раствора 100 мл/ч

Скорость протекания нингидрина .50 мл/ч

Давление буферного раствора при 55°С 8—12 атм

Продолжительность анализа, включая регенера- 75 мин цию

Программирование 0—25 мин раствор А,

. 25—62 мии раствор " Г, 62—63 мин 0,2 н. NaOH, 63—73 мин раствор А

Примечания. Во многих случаях, прежде всего при селекции растений и оценке кормов, бывает достаточно определить содержание лишь метионина и лизина. Метод быстрого анализа позволяет выполнить целую серию ориентировочных опытов. На малой колонке в анализаторе с приведенной выше программой метионин выходит отдельным пиком между пиками валина и изолей-цина, а пик лизина — между пиками аммиака и гистидина.

9. Оценка результатов. В инструкции к прибору обычно описано, как нужно производить оценку хроматограммы, поэтому

мы не рассматриваем здесь этот вопрос.

10. Источники ошибок. Автоматический аминокислотный анализатор— довольно сложный прибор; при работе с ним следует

иметь в виду, что возможны артефакты, обусловленные следующими причинами: а) механическими неполадками прибора, б) химическими факторами, в) неточностью в работе.

Очевидно, основные источники ошибок могут быть различными в разных лабораториях и для разных типов приборов, поэтому ниже мы обратим внимание лишь на ошибки более общего характера.

Наблюдаемые неполадки

Пики Асп, Тре, Сер, Глу накладываются друг на друга

Пики Глу и Про перекрываются или меняются местами

Асимметричные лики

Нестабильная линия фона, «Еыбросы» на хроматограмме при каждой длине ЕОЛНЫ

Периодические изменения (повышение и понижение) линии фона

Внезапное падение дарления буферного раствора

Внезапное падение давления растнора нингидрина

Линии фона при длине ЕОЛНЫ 570 и 440 нм поменялись местами

На самописце появляется прерывистая линия

Появление на хроматограмме необычного пика; чаще всего новые компоненты появляются перед аммиаком и аргинином

Повышение линии фона между пиками аммиака и гистидина

Пики слишком низкие

Возможная причина

Колонка неправильно уравновешена буфером слишком высокой концентрации) .

Нарушения в системе, поддерживающей температуру колонки, температура занижена.

Повышенное давление на смолу буферного раствора.

Загрязнение смолы тяжелыми металлами (смолу следует извлечь из колонки и промыть ЭДТА и кислотой).

Размножение бактерий (необходима обработка горячей щелочью).

Загрязнение белком (необходима обработка горячей щелочью).

Пузырьки воздуха или плавающие частицы в проточной кювете (например, гранулы смолы).

Не закреплены держатели кюветы в спектрофотометре.

Неполадки в электронной схеме самописца (в усилителе).

Нарушение работы насоса, утечка в кранах.

Нарушения в системе подачи буферного растЕОра: а) пузырьки воздуха в насосе, б) прокол в подающем шланге, в) утечка в клапане насоса, г) резиновые прокладки износились или повреждены.

Воздух в насосе, подающем нин-гидрин (нингидрин израсходован); прокол в соединительном шланге.

Изменилось соотношение элюат — нингидрин; один из насосов плохо работает.

Плохие контакты в электронной системе ламп; окислились контакты микропереключателя самописца.

Загрязнен буферный раствор для нанесения.

Аммиак в буферном растЕоре; загрязненная дистиллированная вода. Обесцветился нингидрин (реокислеПики аммиака и лизина перекрываются

Нет цветной реакции иие); «устарели» лампы; сильно загрязнена смола.

Сильно загрязнена смола; испорчен клапан между сосудами с буферными растворами 2 и 3

Неполадки в системе, обеспечивающей поддержание необходимой температуры реакционной смеси; нет нингидрина.

Цитированная литература

1. Benson J. V., Gordon M. J.,

страница 75
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
kinesio tape купить
Самое выгодное предложение от магазина компьютерной техники КНС - купить корпус - 19 лет надежной работы.
шкафы металлические для промышленных помещений в москве
стальные сковородки без покрытия купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.07.2017)