химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

грамме можно наблюдать так называемое «аммиачное плато», которое начинается перед пиком аммиака и кончается после пика гистидина. Чем выше это плато, тем меньше чувствительность прибора в тех пределах, где выходят пики аммиака, лизина и гистидина. Чтобы избежать высокого фона, следует применять реактивы высокой чистоты и деионизованную воду, а также запретить курение в комнате, где стоит прибор.

5. Заполнение колонки. Заполнение малой колонки для определения основных аминокислот. Около 15 мл смолы смешивают с

0,2 н. NaOH. После оседания частиц надосадочную жидкость декантируют, смолу суспендируют в растворе.В, перемешивая при комнатной температуре 30 мин. После оседания частиц надосадочную жидкость опять декантируют и всю процедуру повторяют. Затем смолу смешивают с двумя объемами раствора В. На дно колонки на металлическую сетку кладут круглый фильтр и наливают около 2 мл раствора В. Смолу суспендируют в 2 объемах раствора В, наливают в колонку и оставляют стоять 5—10 мин. Затем к колонке подключают раствор В. Высота осевшей смолы в колонке должна быть 6—8 см. Через колонку 3 раза поочередно пропускают 0,2 н. NaOH и раствор В.

Заполнение большой колонки для разделения кислых и нейтральных аминокислот при двухколоночном методе. Для одной колонки требуется около 50 г смолы. Большая колонка заполняется так же, как и малая (описано выше), за исключением того, что вслед за обработкой щелочью смолу суспендируют в растворе А и последующую обработку в колонке также производят щелочью и раствором А.

Заполнение колонки при однаколоночном методе. При одноко-лоночном методе анализа в системе двух растворов эти растворы отличаются по концентрации Na+B 4 раза. В системе трех буферных растворов первый и третий растворы отличаются по концентрации Na+ в 8 раз. Столь большие различия могут влиять на объем смолы в колонке, если заполнение ее вести обычным способом. Чем выше молярность раствора, тем меньше набухание и соответственно объем смолы в колонке. Поэтому если при заполнении колонки был использован первый низкомолярный буфер, а при последующей обработке применялся буферный раствор более высокой молярности, то объем смолы в колонке может заметно.уменьшиться, что при повторном цикле пропускания растворов приведет к очень сильному спрессовыванию. Во избежание этого заполнение колонки проводят следующим образом.

Смолу смешивают с 0,2 н. NaOH, надосадочную жидкость декантируют, а осадок заливают раствором Г или Д при работе в двухбуферной и раствором Е при работе в трехбуферной системе. После 30 мин уравновешивания жидкость декантируют, а смолу вновь суспендируют в данном растворе. После очередной декантации смолу смешивают с двумя объемами раствора и вливают в колонку, как описано выше. Важно заполнять колонку в растворе высокой молярности. После того как столбик смолы в колонке достигает 50 см, для окончательной упаковки через колонку в течение 20 мин пропускают раствор высокой молярности. Затем повторяют пропускание растворов, начиная со стартового, и этот цикл обработки проделывают еще 3 раза. Следует иметь в виду, что из-за различий в молярности продолжительность каждого цикла занимает по крайней мере 20 мин.

Благодаря высокой концентрации ионов натрия (0,8 и 1,5 н.) в используемых растворах совсем не обязательно проводить каждый раз регенерацию колонки щелочью. Обработку щелочью целесообразно производить один раз после каждых 15—20 анализов, а проведя 30 анализов, рекомендуется извлечь смолу из колонки и обработать подогретой щелочью.

6. Приготовление пробы. Гидролиз пептидов и белков. Анализируемый материал растворяют или суспендируют в 6 н. HCI, которую берут примерно в 200-кратном избытке. Через полученный кислый раствор или суспензию продувают азот и ампулу запаивают. Гидролиз продолжается 48—72 ч при 106°С, а по окончании его кислоту удаляют над КОН и Р205 при 80°С в вакуумном эксикаторе.

Важно достаточно быстро удалить соляную кислоту: при мед-, ленном ее удалении возможно частичное разрушение аминокислот.

При кислотном гидролизе триптофан разрушается полностью, а серии и треонин — на 5—10%; разрушаются также цистин, цис-теин и метионин. Из метионина получается главным образом метио-нинсульфоксид, который частично снова превращается в метионин в процессе гидролиза. Серусодержащие аминокислоты могут быть определены только в окисленных образцах (например, окисленных надмуравьиной кислотой).

Освобожденный от кислоты гидролизат растворяют в смеси 0,2 н. NaCl и 0,01 н. НС1 (раствор для нанесения).

Подготовка проб сыворотки крови. Анализируемую сыворотку смешивают с сульфосалициловой кислотой (20 : 1) и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают в 5-миллилитровую колбочку. Осадок промывают двумя порциями по 1,5 мл раствора для нанесения и объем объединенной надосадочной жидкости доводят до 5,0 мл тем же раствором.

Подготовка проб мочи. К 5 мл мочи добавляют 2 н. NaOH до рН 11—12 и раствор высушивают в вакуумном эксикаторе для удаления аммиака. Сулой остаток растворяют в 10 мл раствора для

страница 73
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://help-holodilnik.ru/remont_model_1148.html
блок управления вентиляции ace cr2-75-3r0/n
билеты лепс купон
кровать орматек соната kids двухъярусная

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.09.2017)