химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

пользуется, то следует каждый день включать его на несколько минут для циркуляции растворов и менять при этом положение всех кранов. Когда прибор выключают на длительное время, необходимо удалить буферные растворы и промыть его дистиллированной водой. Смола должна храниться в щелочном растворе в колонке или в каком-либо сосуде.

3. Смола. В современных анализаторах применяются смолы со

сферическими частицами, благодаря которым скорость протекания

растворов через колонку при относительно небольшом давлении

может быть довольно высокой. Если частицы смолы имеют

одинаковые размеры и давление в колонке постоянно в определенных пределах, то смола заметно не сжимается. Но даже при абсолютной однородности частиц смолы после 30 анализов ее следует

удалять из колонки и инкубировать в 2 н. NaOH при 80°С в течение

30 мин. Закончив инкубацию, жидкость сливают и смолу суспендируют в 0,2 н. NaOH. После осаждения частиц смолы надосадочную жидкость вновь сливают, а ионообменник суспендируют в буферном растворе определенной молярности в зависимости от применяемого метода. В колонку смолу вносят в этом же буферном растворе, а затем им же (тремя рбъемами колонки) окончательно отмывают колонку перед нанесением препарата.

4. Буферные растворы. Раствор для нанесения образца: 0,2 М NaCl в 0,01 н. НС1. Приготовление: 11,6 г NaCl и 0,8 мл концентрированной НС1 растворяют в деионизованной дистиллированной воде в конечном объеме 1 л.

Элюирующие растворы: состав элюирующих буферных растворов приведен в табл. 8.

Таблица 8

Буферные растноры для автоматического аминокислотного анализатора

А Б в г д Е

Na+, М 0,2 0,2 0,35 0,8 0,8 1,6

рН 3,28 4,25 5,28 4,25 4,25 6,0

Конечный объем, 5000 5000 5000 5000 5000 5000

мл

Лимонная кислота 70,5 282,0 123,0 282,0 70,5 35,25

(одноводная), г

НС1 (уд. вес 1,19), 61,6 167,5 32,5 167,0 41,88 —

мл

NaOH, г 40,0 160,0 70,0 160,0 40,0 20,0

NaCl, г — — — — 175,32 438,75

Этанол, мл 200 — — — — —

Детергент (брий 10 10 10 10 10 10

35), г

Для приготовления всех растворов используется деионизован-ная дистиллированная вода, которую можно получить, пропуская дистиллированную воду через колонку, заполненную катионо- и анионообменниками.

Необходимо, чтобы растворы А и В имели строго определенный рН, поскольку даже небольшое изменение рН вызывает значительное ухудшение разделения. При элюировании раствором А маркером на хроматограмме может служить цистин. В идеальном случае он выходит между аланином и валином. Если же рН выше 3,28, пик цистина смещается ближе к пику аланина или даже сливается с ним. С другой стороны, если рН раствора ниже 3,28, пик цистина смещается к пику валина, перекрывает его или даже предшествует ему на хроматограмме. В первом случае буфер подкисляют добавлением 0,5—1,0 мл концентрированной НС1 на 1 л раствора,

а во втором рН раствора повышают, добавляя такое же количество 50%-ного раствора NaOH. Необходимо отметить, что при под-щелачиваиии возрастает концентрация ионов натрия, а следовательно, увеличивается мол яркость раствора А. При увеличении концентрации Na+с 0,2 до 0,25 н. пики аспарагиновой кислоты, треонина, серина, глутаминовой кислоты и пролина сливаются. При элюйровании раствором В маркером служит гистидин. Если рН раствора слишком высокий, пик гистидина накладывается на пик аммиака, а если слишком низкий — увеличивается время, необходимое для элюирования. Для колонки высотой 6—8 см при скорости протекания 68 мл/ч максимальная продолжительность элюирования 1ч.

Даже если анализатор используется непрерывно, из-за опасности размножения бактерий не следует готовить более 5 л буфер-, ных растворов. Первым признаком пророста (когда раствор еще не имеет хлопьев) является асимметрия пиков, в особенности в восходящей части, и слияние пиков аммиака и лизина при одноколо-ночной процедуре. При обильном проросте оба пика полностью накладываются друг на друга. Проросший раствор следует немедленна вылить, посуду тщательно отмыть сначала детергентом, а затем деионизованной водой; эту же процедуру необходимо проделать с соединительными трубками. Проросшую смолу нельзя отмывать в колонке, ее следует извлечь и промыть теплым щелочным раствором.

Небольшие колебания рЦ растворов Г, Д и Е не столь важны при элюйровании, как изменения в концентрации ионов натрия. Если концентрацию Na+ уменьшить на 0,05 М, расстояние между пиками аммиака, лизина, гистидина и аргинина на хроматограмме увеличивается. При увеличении концентрации ионов натрия на 0,05М аммиак выходит сдвоенным пиком с лизином. Концентрация ионов натрия в растворе Г зависит от качества используемой NaOH, а в растворах Д и Е — от чистоты NaCl. Судя по нашему опыту, большая часть препаратов NaCl содержит заметные количества воды, поэтому мы рекомендуем пользоваться препаратами, предварительно высушенными при 100°С в течение 6 ч.

Очень важно, чтобы растворы были свободны от аммиака. Если растворы, особенно А, содержат аммиак, то при одноколоночном методе на хромато

страница 72
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ручки врезные мебельные
дизельные печи для отопления дома
gomlden b2092
шашка таксиста своими руками

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)