химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

В БРОМЦИАНОМ

Принцип метода. В кислой среде бромциан специфически расщепляет полипептидные цепи белков по метиониновым остаткам с образованием гомосеринлактона (иодацетамид взаимодействует с белками подобно бромциану). Реакция протекает по следующей схеме:

СН3 I

сн2

сн2

R—СН—NH—СО—СН О

I I II

СООН NH—С—R'

СН3

[J~]S+—СН2—СО—NH2

I-CHjCONHj I

? сн2

35—40°С |

сн2

СН—СО—NH—СН—R

I I

NH—С—R' СООН

О

СН3 I

S—СН,СО—NH2 +

Н2 С

/ \

О СН,СН—NH—СО—R'

R—СН—NH=C-I

СООН

Н2 С

/ \

О СН,

R_CH--NH2 ? [HI] +0=СсоонСН—N Н—CO—R'

Область применения. Расщепление белков на относительно крупные полипептиды при их структурном исследовании.

МЕТОДИКА |

Исследуемый белок растворяют или суспендируют в 0,1 н. НС1, прибавляют 30-кратный избыток бромциана, инкубируют в вытяжном шкафу с перемешиванием в течение 24 ч и затем реакционную смесь лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЕ

Для успешного анализа весьма важно выбрать подходящий метод фракционирования и очистки крупных полипептидных фрагментов, появившихся в результате действия бромциана на белок. Вначале удобно провести предварительное фракционирование по

размеру молекул с помощью гель-фильтрации, а затем применить ионообменную хроматографию на колонке ДЭАЭ- или КМ-цел-люлозы, лучше в присутствии мочевины.

Рекомендуемая литература

Boyer P. D.,The Enzymes, Vol. Ill, Academic Press, New York, London, 1971. Colowtck S, P., Kaplan N. 0., eds., Methods in Eazymology, Vol. XXV, Academic Press, New York, London, 1972. Hill R. I.,Adv. Protein Chem., 20, 37 (1965).

Kasper С. В., in: Needleman S. P. ed., Protein Sequence Determination, p.

137—165, Springer Verlag, Berlin—Heidelberg, New York, 1970. Witkop B.„ Adv. Protein Chem., 16, 221 (1961).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ АВТОМАТИЧЕСКИХ АМИНОКИСЛОТНЫХ

АНАЛИЗАТОРОВ

К

Принцип метода (фиг. 35). Анализируемый материал фракционируется на колонке К, заполненной смолой типа дауэкс 50 х 8. Подача буферных растворов (Б19 Б21 Б3) осуществляется насосом Я i и регулируется краном/Ср. Выходящая из колонки жидкость поступает в смеситель С, содержащий раствор нингидрина (//г), который подается насосом #2. Эта реакционная смесь проходит через капилляр Кп, погруженный в водяную баню с температурой 100° С, где и происходит характерная для аминокислот цветная реакция. Далее окрашенный элюат проходит через спектрофотометр Ф, показания которого регистри: руются самописцем См.

Фиг. 35. Схема работы автоматического аминокислотного анализатора (обозначения см. в тексте).

Область применения. Химические и биохимические исследования белка, синтез аминокислот и пептидов, исследования гормонов, клиническая диагностика, экспериментальная и промышленная энзимология, селекция растений и др.

МЕТОДИКА

/. Выбор аналитического метода. Аминокислоты можно определять с помощью двух- или одноколоночного метода. В первом случае основные аминокислоты анализируют на отдельной колонке с высотой столбика смолы 6—8 см, а кислые и нейтральные аминокислоты— на другой, более длинной колонке высотой 50 см. При этом для определения основных аминокислот требуется около 1 ч, а для определения кислых и нейтральных аминокислот — около 3 ч.

Во втором методе для определения всех аминокислот используют лишь одну колонку. Время, необходимое для анализа, в этом случае зависит от числа используемых "буферных растворов, что в свою очередь определяется имеющейся аппаратурой. Если прибор, например анализатор Унихром фирмы «Весктап» (США), автоматически позволит производить однократную смену одного буферного раствора на другой, то предпочтительнее применять двухбуферную систему. В этом случае весь анализ занимает 4 ч. Если же прибор позволяет автоматически менять протекающий буферный раствор два или несколько раз, то используют систему из трех буферных растворов, что сокращает продолжительность анализа до 3 ч. При соответствующей комбинации методов продолжительность анализа двухколоночным методом можно еще уменьшить (см. ниже).

2. Аппаратура. В настоящее время можно приобрести автоматические аминокислотные анализаторы нескольких типов, каждый из

которых имеет свои преимущества и недостатки. Для обычных целей более экономичны простые анализаторы. Это определяется скорее не ценой, а надежностью как в обеспечении непрерывности операции, так и в способе программирования работы прибора. По-видимому, прибор с приспособлением для автоматического нанесения

образца, надежно обеспечивающий непрерывность в работе, можно

считать вполне экономичным.

Аминокислотный анализатор — это сложный прибор, требующий постоянного ухода даже при аккуратном обращении с ним. Анализатор не должен выключаться на длительное время (1—2 дня). Буферные растворы являются прекрасными средами для размножения грибов и других микроорганизмов.Даже при 1—2-дневной остановке прибора возможно бактериальное прорастание растворов, искажающее результаты анализа (см. источники ошибок).Если прибор постоянно не ис

страница 71
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
участки в подмосковье новая рига
скамья чугунная родник
контактные линзы hera glamour
магазины столы для кухни

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.09.2017)