химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

нным высокоспецифн-ческим протеолитическим ферментом, который способен избирательно расщеплять пептидные связи, образованные остатками лизина и аргинина. Однако имеющиеся в продаже препараты трипсина, приготовленные из экстрактов поджелудочной железы, могут быть загрязнены другими протеазами, поэтому необходимо тщательно подбирать подходящий для конкретных целей препарат трипсина. Лучше всего пользоваться препаратом, классифицированным как «свободный от химотрипсина». Если в распоряжении исследователя нет такого препарата, то рекомендуется очистить имеющийся трипсин следующим образом: фермент растворяют в 0,01 и. НС1 и инкубируют при 37°С в течение 16 ч, затем раствор фильтруют и доводят рН до 7,8.

2. Триптический гидролиз. Гидролизуемый материал растворяют или суспендируют в 0,1 М растворе двууглекислого аммония до конечной концентрации 1% и добавляют к нему У30 часть (по отношению к количеству бежа) трипсина. Смесь инкубируют при 37°С 3 ч, затем добавляют еще 1/30 часть трипсина, вновь инкубируют в течение 1 ч, помещают гидролизат в кипящую водяную баню на 15 мин, фильтруют и лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

I. Гидролиз нерастворимых белков и белковых производных рекомендуется проводить в автотитраторе. Гидролизуемый материал суспендируют в дистиллированной воде, 0,05 н. раствором NaOH доводят рН до 7,5, добавляют трипсин и проводят реакцию при 37°С в атмосфере азота, постоянно перемешивая суспензию и поддерживая рН 7,5 добавлением 0,05 н. раствора NaOH. Гидролиз продолжается в течение 4—5 ч.

2. Нативные белки либо вовсе не атакуются трипсином, либо перевариваются крайне медленно. Не следует забывать также, что при триптическом гидролизе могут образоваться высокомолекулярные нерастворимые структуры, устойчивые к действию фермента, так называемые «кор»-структуры (core).

3. С помощью обратимой, или необратимой блокировки e-NH2-групп остатков лизина можно ограничить триптический гидролиз расщеплением только пептидных связей аргинина. Обратимую блокировку можно вызвать, например, с помощью трифторацетили-рования.

Д. ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ ХИМОТРИПСИНОМ

Принцип метода. Под действием химотрипсина разрушаются пептидные связи, в образовании которых принимают участие карбоксильные группы ароматических аминокислот.

МЕТОДИКА

К 1%-ному раствору гидролизуемого субстрата (белка) прибавляют VgQ часть (по отношению к количеству белка) кристаллического химотрипсина. Смесь' помещают в автотитратор и гидролизуют в атмосфере азота при медленном перемешивании, поддерживая рН 8,0 автоматическим добавлением 0,1 н. раствора NaOH. Гидролиз продолжается до тех пор, пока не прекратится потребление раствора щелочи. Обычно для этого требуется 4—8 ч, после чего фермент инактивируют кипячением, поместив реакционную смесь на 10 мин в кипящую водяную баню. Осадок удаляют фильтрованием, а фильтрат лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Химотрипсии гораздо менее специфичен, чем трипсин. Избирательное расщепление пептидных связей, в которых принимают участие карбоксильные группы ароматических аминокислот, происходит только при краткосрочном гидролизе. Длительный гидролиз приводит к разрушению и других пептидных связей, например образованных остатками лейцина, гистидина и глутамина.

2. Очень устойчивы к действию химотрипсина связи Тир-Про и Фен-Про, частично устойчивы связи, подобные Тир-Тир.

Е. ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ ПЕПСИНОМ

Принцип метода. В молекуле белка и пептида пепсин способен разрывать пептидные связи нескольких типов, поэтому в результате гидролиза получается сложная смесь пептидов.

Область применения. Структурный анализ белков и пептидов.

МЕТОДИКА

К 1%-ному раствору гидролизуемого субстрата (белка) в 0,01 н. НС1 прибавляют 1/30 часть (по отношению к количеству белка) кристаллического пепсина. Смесь инкубируют 16—18 чпри25°С, затем нейтрализуют и лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

Пепсин не обладает специфичностью. При пепсиновом гидролизе может происходить расщепление следующих пептидных связей: Х-Тир, Х-Фен, Лей-Х, Х-Лей, Глу-Х, Х-Глу и т. д.

Ж. ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ ПАПАИНОМ

Принцип метода. Папаин, не обладающий выраженной специфичностью, гидролизует *5елки и пептиды до мелких фрагментов. Область применения. Структурный анализ белков и пептидов.

МЕТОДИКА

/. Активация папаина. 10 мг имеющегося в продаже папаина растворяют в 1 мл 1%-ного NaCl и выдерживают при 37°С в течение 1 ч. Сразу же после такой обработки фермент готов для использования.

2. Папаиновый гидролиз. К 1%-ному раствору гидролизуемого субстрата (белка) прибавляют папаин до конечной концентрации 0,02% и 1,0 н. NaOH подводят рН до 7,0. Смесь инкубируют в авто-титраторе при комнатной температуре в атмосфере азота, медленно перемешивая на магнитной мешалке в течение 20—24 ч. Реакцию останавливают кипячением, реакционную смесь фильтруют и лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЕ

Папаин — не специфический фермент, он расщепляет различные пептидные связи, например такие, как Глу-Глн, Цис SO 3Н-Сер, Глн-Лей, Глу-Асн и т. д.

3. РАСЩЕПЛЕНИЕ БЕЛКО

страница 70
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
варианты рисунков на баннерах в мебельном магазине
eye free colors gg contact lenses
Atmos DC L 25SP
купить билеты на спектакль свинка пеппа

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)