химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

антителами лошади, часто могут растворяться в избытке как антигена, так и антител.

Для реакции преципитации оптимальными являются те значения температуры, рН и ионной силы среды, которые существуют в организме. Ход реакции преципитации зависит от ионной силы раствора: с увеличением концентрации соли выше 0,15 М постепенно замедляется образование преципитата. В то же время рН среды в довольно широком диапазоне, от 6,5 до 8,6, не влияет на реакцию преципитации.

Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии.

Иммунохимические методы, основанные на реакции преципитации, очень удобны для качественного и количественного анализа белков, для определения гомогенности белковых препаратов и наличия в них примесей, а также для идентификации компонентов белковых смесей. Как вспомогательный метод реакция преципитации применяется для изучения структуры белка. Преимущество этого метода по сравнению с другими состоит в том, что он может быть использован тогда, когда нельзя провести количественный химический анализ, например при определении данного компонента в смеси белков. Именно в этих случаях результаты, полученные с помощью иммунохимических реакций, могут быть очень полезны.

МЕТОДЫ ИММУНОДИФФУЗИИ

Наиболее простой способ исследования растворимых антигенов в реакции преципитации заключается в том, что исследуемый раствор смешивают со специфической иммунной сывороткой, а затем наблюдают образование преципитата. Эта реакция применяется главным образом для определения титров. Только в том случае, когда реакция ставится с иммунной сывороткой, специфичной к данному белку, величина титра может служить характеристикой белкового препарата. Действительно широкое применение имму-нохимического подхода к анализу белков началось только после того, как появились иммунодиффузионные методы исследования.

В 1905 г. Бекхольд, наслоив козью сыворотку на смешанную с желатиной кроличью антисыворотку к белкам козы, наблюдал в геле образование двух полос преципитации. Иммунологическая природа этого «коллоидно-химического» явления была раскрыта лишь спустя несколько десятилетий. На основе реакции преципитации в геле был разработан ряд новых методов исследования, которые не только позволили охарактеризовать иммунологические свойства белков, но и открыли новые перспективы их углубленного анализа.

В сущности все методы иммунодиффузии основаны на явлении, которое наблюдал Бекхольд: взаимодействии антиген — антитело в геле. Растворимый белковый антиген и иммунная сыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте встречи обоих реагентов возникает полоса преципитации, которую можно легко наблюдать и регистрировать.

Для приготовления полужидкого геля используют ряд веществ. Их наиболее важным свойством должна быть инертность по отношению к исследуемым белкам и иммунной сыворотке. Эти вещества не должны вступать с ними в какие-либо реакции. К таким веществам можно отнести агар, крахмал, желатину, пектин и т\ д. В настоящее время наиболее широко применяется агар, который оказался наилучшей средой при повседневной постановке реакций иммунодиффузии. При нагревании агар легко растворяется в воде и растворах солей и образует плотный гель при комнатной температуре. Прозрачность агара позволяет ясно различать возникающие в геле линии преципитации и окрашивать их соответствующими красителями.

Особое значение методов иммунодиффузии в изучении белков состоит в том, что с их помощью можно характеризовать белки на основании свойств, отличных от тех, которые были известны ранее. Электрофорез позволяет фракционировать белки в соответствии с их физико-химическими свойствами, в то время как с помощью классических методов иммунологии можно проводить дальнейшую дифференцировку белковых компонентов по антигенным свойствам.

Поэтому методы иммунодиффузии открывают перед исследователем дополнительные возможности:

1. Они позволяют одновременно анализировать несколько систем антиген—антитело (в смеси белков).

2. Можно сравнивать между собой разные белковые антигены.

3. Одновременно можно изучать и иммунологические и электрофоретические свойства белков.

4. Можно проводить количественное определение белков.

Каждый компонент белковой смеси и соответствующие антитела

иммунной сыворотки в геле диффундируют навстречу друг другу, и каждая пара реагентов при слиянии образует одну линию преципитации. Число появившихся линий преципитации соответствует минимальному числу разных антигенов и соответствующих антител, присутствующих в системе. Методы иммунодиффузии очень чувствительны: они поз

страница 7
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://www.kinash.ru/etrade/goods/4182/city/Nizhnii-Novgorod.html
заказ микроавтобусов в москве недорого
стеклянный поднос
вентилятор канальный радиальный

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.07.2017)