химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ой кислоте растворяют исследуемый материал, инкубируют при 4°С 60 мин и упаривают в ротационном испарителе при низкой температуре. Сухой остаток растворяют или суспендируют в небольшом объеме дистиллированной воды и вновь упаривают.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При окислении надмуравьиной кислотой остатки цистеина или цистина превращаются в стабильную цистеиновую кислоту, остаток метионина — в стабильный метионинсульфон, а тирозин и триптофан полностью разрушаются.

2. Если исследуемый материал (например, высокомолекулярный белок) не растворяется в надмуравьиной кислоте, то его суспендируют в ней и инкубируют в течение 3—5 ч при 4° С С перемешиванием.

2. ВОССТАНОВЛЕНИЕ И КАРБОКХИМЕТИЛИРОВАНИЕ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

Исследуемый материал растворяют в б М мочевине при рН 7,2 и добавляют меркаптоэтанол в 10-кратном молярном избытке по отношению к содержанию цистеина. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, затем к ней добавляют иод- или бромацетат в 50—100-кратном молярном избытке по отношению к цистину, содержащемуся в исследуемом образце, оставляют на 2 ч при комнатной температуре и на сутки при 4°С. После этого раствор диализуют против дистиллированной воды для удаления мочевины.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Поскольку свободные SH-группы восстановленных белков очень реакционноспособны, для предотвращения реокисления их следует карбоксиметилировать иод- или бромацетатом.

2. Восстановленные и карбоксиметилированные белки обычно плохо растворяются в воде. Если при снижении концентрации мочевины они выпадают в осадок, то необходимость диализа отпадает. В этом случае белок, выпавший в осадок, можно непосредственно отмыть от мочевины 0,01 н. НС1, при этом удаляется также избыток алкилирующего реагента.

3. После карбоксиметилирования и отмывания кислотой или после диализа исследуемый материал рекомендуется суспендировать в дистиллированной воде и лиофилизировать.

?Б, ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ В 6 н. НС1

Принцип метода. Гидролиз проводят при 105°С в 6 н. НС1 в запаянной ампуле.

Область применения. Гидролиз белков и пептидов для определения их аминокислотного состава.

(МЕТОДИКА1

а) Очистка НС1. Концентрированную НС1 многократно перегоняют в стеклянном дистилляционном аппарате (фирма Quik-fift, США) над SnCl2. В экспериментах используют фракцию с постоянной точкой кипения.

б). Гидролиз. Гидролизуемый материал растворяют или суспендируют в 100—200-кратном избытке 6 н. НС1 в ампуле.

Через ампулу продувают азот или откачивают из нее воздух, а затем ее запаивают и 24—72 ч инкубируют при 105°С.

в) Удаление соляной кислоты. Гидролизат большого объема разбавляют дистиллированной водой и затем упаривают в ротационном испарителе. Сухой остаток суспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды и упаривание повторяют. Гидролизат в небольшом объеме переносят в чашку Петри и для удаления кислоты помещают в вакуумный эксикатор над КОН или Рг05.

ПРИМЕЧАНИЕ

При гидролизе происходит разрушение некоторых аминокислот: полностью распадается триптофан, на 50—60%—карбоксиметил-цистеин и на 5—10% —треонин и серии. Эти потери следует учитывать при количественном анализе, вводя соответствующие поправки. Чем быстрее производится удаление кислоты, тем меньше вероятность нежелательных побочных реакций.

В. ЧАСТИЧНЫЙ КИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ

И ПЕПТИДОВ

Принцип метода. Если исследуемый белок или пептид, растворенный в концентрированной НС1, инкубировать при 37°С в течение 72—96 ч, то происходит их частичное разрушение. В полученном гидролизате среди прочих продуктов расщепления преобладают ди-и трипептиды, т. "е. при гидролизе происходит расщепление относительно небольшой части пептидных связей.

Область применения. Структурный анализ больших пептидов, сравнительный анализ белков, выделение определенных пептидов (например, кислых, основных и нейтральных пептидов) из белков и полипептидов.

МЕТОДИКА

Белок или пептид гидролизуют. в 100-кратном избытке концентрированной НС1 при 37°С в течение 3—4 дней в запаянных ампулах, из которых откачан воздух. После гидролиза кислоту удаляют, как описано выше.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Во время гидролиза происходит разрушение всех остатков триптофана.

2. Гидролизаты в среднем на 25% состоят из свободных аминокислот, а содержащиеся в них пептиды в основном представлены ди пептидами.

3. Частичный гидролиз не в концентрированной, а в разбавленной кислоте может привести к артефактам, возникающим в результате реакций транспептидирования.

4. Перед частичным гидролизом рекомендуется окислить исследуемый материал надмуравьиной кислотой в силу тех же самых причин, о которых уже упоминалось в разделе, посвященном полному гидролизу.

Г. ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ ТРИПСИНОМ

Принцип метода. Под действием трипсина в белке или пептиде происходит расщепление пептидных связей, образованных остатками лизина и аргинина.

Область применения. Исследование структуры белка.

МЕТОДИКА

/. Выбор подходящего препарата трипсина и его предварительная очистка. Трипсин является наиболее изуче

страница 69
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
холодильник девоо fr510т
martinelli dnd italy
стул винтовой промышленный
курсы механиков холодильного оборудования екб

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(28.07.2017)