химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

. е. не содержащего других белковых фракций) препарата того белка, концентрацию которого требуется определить в смеси. Этот белок используется в реакции в виде стандартного раствора известной концентрации. Во-вторых, необходимо располагать моноспецифической (т. е. реагирующей только с данным белком) иммунной сывороткой.

2. Титры антител в иммунных сыворотках могут широко варьировать. Поэтому в предварительных опытах следует определить то разведение антисыворотки, при котором наблюдаются наиболее чёткие и легко регистрируемые преципитационные кольца. В зависимости от титра имеющейся в распоряжении исследователя антисыворотки ее можно использовать в 8-, 16- или 32-кратном разведении.

3. При учете результатов реакции через 24 ч между концентрацией антигена и диаметром преципитационного кольца выявляется логарифмическая зависимость. Однако можно производить учет реакции и через больший отрезок времени, продолжая наблюдать за .диффузией антигена в геле и ежедневно измеряя диаметры преципитационных колец. Через несколько дней в наблюдаемой системе наступает равновесие, т. е. избыток антигена в лунке исчезает и увеличение диаметра преципитационного кольца прекращается. На этой стадии существует линейная зависимость между концентрацией антигена и диаметром преципитационного кольца. 4. Данный метод хорошо. себя зарекомендовал при определении содержания тех фракций сыворотки крови, которые удается выделить в достаточно чистом виде (например, IgG, IgA, IgM, тран-сферрин. и альбумин). Вообще с помощью этого метода можно определить концентрацию любого гомогенного белка, если располагать специфичной к нему антисывороткой.

. 5. Результаты реакции можно зарегистрировать, фотографируя _нативный препарат или окрашивая его красителями, выявляю* щимй белок (см, стр. 135). Окрашивание в ряде случаев облегчает регистрацию результатов, так как окрашенные преципитационные кольца легче измерять. Однако оно может и затруднить измерение, если при этом, например, изменяется^форма кольца.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ ПО БАКХАУЗУ? [1]

Сначала исследуемый антиген подвергают электрофорезу макрометодом, описанным на стр. 137. Затем в непосредственной близости от области разделения антигена BJагаровом геле вырезают широкий желобок, который заполняют смесью расплавленного агара с иммунной сывороткой. Белки, разделенные в электрическом поле, диффундируют в агаровый гель, содержащий антитела. Расстояние, проходимое белками обусловлено закономерностями линейной диффузии в геле (см. стр. 128). Поэтому, измерив смещение вершин преципитационных полос от границы желобка, можно определить скорость диффузии, т. е. величину k, а с ее помощью и концентрацию исследуемых белковых фракций.

11. ИММУНОДИФФУЗИОННЫЙ АНАЛИЗ БЕЛКОВ НА АЦЕТАТ-ЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ МЕМБРАНАХ [13]

Примененные Коном (стр. 71) для электрофореза ацетат-целлюлозные мембраны могут быть также {успешно использованы в опытах по иммунодиффузии. Ацетат-целлюлозные мембраны лишены ряда недостатков, присущих агаровому гелю.

ДВУМЕРНАЯ.ДВОЙНАЯ ДИФФУЗИЯ

Принцип метода. Раствор белкового антигена Ги специфическая иммунная сыворотка, диффундируя навстречу друг другу на ацетат-целлюлозной мембране, в месте встречи образуют полосы преципитации.

Область применения-, см. стр. 131.

МЕТОДИКА

Из листа ацетат-целлюлозной мембраны вырезают круг нужного диаметра и карандашом или недиффундирующей краской от? мечают на нем места Занесения антигена и иммунной сыворотки. Затем мембрану смачивают буферным раствором, осторожно промокают фильтровальной бумагой и в горизонтальном положении помещают во влажную камеру (например, на дно чашки Петри, крышка которой изнутри выстлана влажной фильтровальной бумагой).

В отмеченные места мембраны капиллярной пипеткой наносят 1—5 мкл раствора антигена и иммунной сыворотки в виде неболь-ших пятен или коротких линий. Обычно иммунную сыворотку наносят на расстоянии 10 мм от места нанесения антигена, но в зависимости от цели эксперимента это расстояние можно варьировать. Мембрану держат во влажной камере до тех пор, пока нанесенный материал полностью не впитается, и затем погружают ее в вазелиновое масло.

В течение двух дней в мембране, оставленной под вазелиновым маслом, при комнатной температуре образуются полосы преципитации.

По окончании инкубации мембрану извлекают из масла и через некоторое время, когда стечет его избыток, быстро проводят через эфир. После этого мембрану на 1—5 ч помещают в физиологический раствор хлористого натрия для удаления растворимых белков, не участвовавших в реакции преципитации; затем ее извлекают, промокают фильтровальной бумагой и окрашивают для выявления полос преципитации, как описано на стр. 73.

ч

ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ

Принцип метода. Исследуемый антиген подвергают электрофорезу на ацетат-делллюлозной мембране. После этого на мембрану наносят специфическую иммунную сыворотку, и в результате ее диффузии образуются полосы преципитации, выявляемые при окрашивании.

Область применения, (см. стр. 137).

Приборы

страница 67
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ограждение металлическое кровельное
двусторонние настенные часы купить
обучение на парикмахеров москва
аренда автобуса москва недорого

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)