химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

прямоугольный желобок для исследуемого антигена (фиг. 33).

Анти~{а+5+3)

2. Электрофорез. Раствор антигена (исследуемого белка или смеси белков) вносят в желобок и проводят электрофорез в течение 3 ч при градиенте напряжения 10 В/см. Рекомендуется использовать электрофоретический прибор с охлаждением. По окончании электрофореза область разделения исследуемого образца в агарозном геле вырезают в виде узкой продольной полосы, содержащей белковые фракции (фиг. 33), и помещают ее на пластинку агарозного геля с иммунной сывороткой.

3. Приготовление геля агарозы, содержащего иммунную сыворотку, и вторая стадия анализа (электрофорез фракций, полученных на первой стадии). Специфическую иммунную сыворотку в соответствующем разведении смешивают с 1%-ной агарозойи наслаивают на стеклянную пластинку размером 10 хЮ см слой толщиной 1,5 мм.

На эту пластинку кладут полоску геля с фракциями исследуемого белка и проводят' электрофорез. Пластинку укрепляют в приборе так, чтобы миграция белковых фракций происходила под прямым углом к продольной оси наложенной полоски агарозного геля (фиг. 33). Электрофорез продолжается 30—90 мин при градиенте напряжения 10 В/см. В ходе электрофореза белковые фракции диффундируют из полоски в гель, содержащий антитела. Мигрируя в нем под действием электрического поля, они образуют преципитационные «пики» в результате специфической реакции с соответствующими антителами. Контуры преципитационных пиков формируются благодаря электрофоретической миграции антигена, а также постепенному уменьшению его избытка в результате этой миграции в геле агарозы. (Известно, что избыток антигена растворяет иммунные преципитаты, поэтому полосы преципитации образуются только там, где избыток антигена исчезает благодаря электрофоретической миграции.)

4. Высота преципитационных пиков, т. е. расстояние между полоской геля, в которой первоначально содержались белковые фракции, и вершиной пика, пропорциональна концентрации антигенов.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. В предварительных опытах рекомендуется уточнить оптимальное соотношение раствора агарозы и иммунной сыворотки в конкретных условиях, т. е. для данного исследуемого антигена и для имеющейся в распоряжении антисыворотки. Если иммунная сыворотка достаточно активна, to ее концентрация в агарозном геле не должна превышать 1 —5 %.

2. Этот метод позволяет определять концентрацию данного белка в белковой смеси при условии, что исследователь располагает соответствующей моноспецифической антисывороткой. В ка* честве примера ниже описана методика определения концентрации IgG в сыворотке крови.

На стеклянную пластинку обычным способом наносят 1 %-ный гель агарозы, содержащий 2,5%-ную иммунную сыворотку анти-IgG. В затвердевшем геле агарозы вырезают нужное число круглых лунок для исследуемой сыворотки и IgG и заливают в них по несколько капель агарозного раствора. Препараты IgG известной концентрации в соответствующем разведении вносят в несколько лунок; в остальные лунки заливают образцы исследуемых сывороток и проводят электрофорез, как описано выше. В зависимости от соотношения концентрации антигена и антител продолжительность электрофореза может варьировать от 2 до 10 ч. Электрофорез* следует закончить, когда прекратится увеличение преципитационных пиков, т. е. когда избыток антигена будет нивелирован электрофоретической миграцией. По окончании электрофореза измеряют расстояние от вершины пика до центра лунки, из которой началась миграция исследуемого образца. Полученная величина прямо пропорциональна концентрации антигена, в данном случае IgG,: в лунке. Основываясь на данных, полученных при соответствующих разведениях препарата IgG известной концентрации, на миллиметровке строят калибровочную кривую, по которой определяют концентрацию IgG в исследуемых образцах сывороток.

3. Количественную оценку результатов и фоторегистрацию преципитационных пиков можно проводить как на нативных, так и на окрашенных препаратах.

10. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОДИФФУЗИИ

Попытки разработать методы иммунодиффузии, позволяющие количественно оценивать содержание антигенов и антител, делались неоднократно. Одна группа таких методов основывается на двойной диффузии в геле по Ухтерлони (см. стр. 131), другая — на измерении скорости диффузии и степени мутности полос преципитации при иммуноэлектрофорезе (стр. 137). Пока эти методы еще не получили широкого распространения*

МЕТОД ГРАДИЕНТА КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИТЕЛ ПО ФЕЙНБЕРГУ [6]

Принцип метода. В результате диффузии антигена в пластинке агарового геля, содержащего иммунную сыворотку, образуется преципитат. Наибольшее разведение антигена, при котором еще происходит преципитация, является его титром.

Область применения. Титрование раствора антигена.

МЕТОДИКА

/. Приготовление пластинки агарового геля. 1%-ный расплавленный агар наливают на дно чашки Петри (см. стр. 131). В за-твердевшем агаровом геле при помощи пробойника для пробок или иного подходящего для этой цели инструмента (фиг. 34) делают лунки для исследуемого антигена и

страница 65
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Фирма Ренессанс лестница на второй этаж п-образная - качественно, оперативно, надежно!
КНС цифровые решения рекомендует планшеты Самсунг - поставка по всей России.
театр на юго-западе афиша
курсы по ремонту кондиционеров в самаре

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.07.2017)