химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

века. В образовании полос преципитации с фракциями нормальной сыворотки человека принимают участие только те антиглобулиновые антитела, которые не встретили соответствующих им иммуноглобулинов в сыворотке больного, диффундируя из зоны антисыворотки в зону нормальной сыворотки. В результате появляются полосы преципитации, которые соответствуют отсутствующему классу иммуноглобулинов, например IgG, IgA или IgM.

2. В полоске геля, содержащего абсорбирующие антигены, в местах образования комплексов антиген — антитело появляются прямые полосы преципитации.

7. ИММУННАЯ ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ [10]

Принцип метода. Метод представляет собой комбинацию фракционирования исследуемого белка при помощи тонкослойной гель-фильтрации с иммунодиффузионным анализом в геле.

Область применения. Получение таких характеристик исследуемых белков, которые определяются размером их молекул и серологическими свойствами.

МЕТОДИКА

1. Тонкослойная гель-фильтрация. На стеклянную пластинку размером 8 х 20 см наносят слой сефадекса G-100 или G-200 в 0,05 М вероналовом буа+б

буферный! раствор I

l

Анти^В,

ферном растворе рН 8,4 так, чтобы высота слоя была 0,5 мм (см. стр. 231). Затем пластинку закрепляют под нужным углом в буферном резервуаре, заполненном 0,02 М трис-НС1 рН 8,0, содержащим 0,2 М NaCl. Методика уравновешивания сефадекса и нанесения образца описаны на стр. 231. Сначала наносят на пластинку I—2 мкл исследуемого образца и контрольные растворы, затем проводят гель-фильтрацию, пластинку извлекают из прибора и помещают на горизонтальную поверхность.

2. Иммунодиффузия. На участке между зонами разделения исследуемого образца и контрольных веществ гель сефадекса

удаляют (фиг. 32). Всю поверхность пластинки заливают слоем расплавленного 1%-ного агара толщиной 1 мм. После его затвердения между зонами исследуемого образца и контрольных соединений вырезают продольную канавку, которую заполняют специфической иммунной сывороткой. Пластинку помещают во влажную камеру и образовавшиеся полосы преципитации фотографируют в на-тивном состоянии или после окрашивания (фиг. 32).

ПРИМЕЧАНИЯ

Основное преимущество этого метода заключается в том, что, исследуя очень малые количества белка, можно охарактеризовать его иммунологические свойства и размер молекул.

8. ЭЛЕКТРОСИНЕРЕЗ [41

Принцип метода. Это один из методов иммунодиффузии, в котором антиген и иммунная сыворотка мигрируют в геле навстречу друг другу не за счет диффузии, а под влиянием электрического поля.

Область применения. Анализ антигенов, обладающих низким коэффициентом диффузии.

МЕТОДИКА

1. Приготовление агаровой пластинки (см. стр. 138).

2. Примерно в середине агаровой пластинки вырезают две круглых лунки диаметром около 5 мм на расстоянии 2—3 см одну от другой. Лунка, расположенная ближе к катоду, предназначена для раствора антигена, а лунка, расположенная в анодной части геля,— для иммунной сыворотки. Непосредственно перед заполнением лунок в каждую из них вносят несколько капель расплавленного агара.

3. После внесения раствора антигена и иммунной сыворотки проводят электрофорез (см. стр. 139) до тех пор, пока в геле между двумя лунками не образуются полосы преципитации.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Под влиянием электрического поля антитела (иммуноглобулины) мигрируют в сторону катода. Если исследуемые антигены (например, белки сыворотки крови) при электрофорезе движутся к аноду, то реакция антиген—антитело происходит в геле между двумя лунками.

2. Электросинерез можно комбинировать с иммуноэлектрофо-резом. Для этого после проведения электросинереза на небольшом расстоянии от лунок, заполненных антигеном и антисывороткой, в геле вырезают канавку (см. стр. 137), которую заполняют соответствующей иммунной сывороткой.

9. КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ГЕЛЕ АГАРОЗЫ, СОДЕРЖАЩЕМ АНТИТЕЛА [14]

J Принцип метода. Анализ включает две стадии: а) электрофорез исследуемого белка в геле агарозы и б) повторный электрофорез полученных фракций в геле, содержащем антитела, перпендикулярно к направлению первого разделения. Полоску геля, содержащего фракции исследуемого белка, полученные на первой стадии, помещают на пластинку геля агарозы, содержащего

иммунную сыворотку, и вновь проводят электрофоретическое разделение под прямым углом к первоначальному направлению. О концентрации различных фракций исследуемого белка можно судить по высоте преципитационных пиков, образующихся в результате миграции антигена в геле, содержащем антитела.

Область применения. Идентификация и количественный анализ белковых фракций.

МЕТОДИКА

Приготовление пластинки геля агарозы. 1 %-ный раствор агарозы, содержащий 1 ммоль лактата кальция, готовят на веронал овом буферном растворе с ионной силой 0,05 и рН 8,6. Подогретую агарозу наслаивают на предметное стекло так, чтобы получился слой геля толщиной 1,5 мм; стекла помещают во влажную камеру и оставляют в холодильнике до затвердения. После этого в катодной трети агарозной пластинки вырезают

страница 64
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ручная терка
производство кресел для кинотеатров в москве
войлочные изделия купить
билеты пилот

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)