химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

и (референс-белки) и соответствующими антисыворотками, то с помощью данного метода можно идентифицировать отдельные компоненты белковой смеси неизвестного состава.

При сравнительном анализе белков по Оссерману используются те же приборы и принадлежности, что и при иммуноэлектрофорезе (см. стр. 137).

МЕТОДИКА

1. Приготовление агаровой пластинки: см. стр. 142.

2. В середине агаровой пластинки вырезают лунку для внесения исследуемого образца, а на расстоянии 3 мм от лунки, по обе стороны от нее, делают две параллельные канавки.

3. После иммуноэлектрофореза исследуемой смеси белков (см. стр. 141) в одну канавку вносят раствор референс-белка, а во вторую заливают иммунную сыворотку к нему (на фиг. 30 — это верхняя канавка). В месте встречи компонентов этой системы, которые диффундируют в агаровом геле, образуются полосы преципитации.

§Т Если исследуемая белковая смесь -имеет общие с раствором ре-ференс-белка антигены, то продольная полоса преципитации» сливаясь с теми полосами, которые появились ранее при иммуноэлектр0форезе, образует как бы продолжение последних (фиг. 30).

Фиг. 30. Сравнительный анализ белков по Оссерману [J6J (объяснение см. в

теките).

ПРИМЕЧАНИЯ

Для успешного анализа белковых растворов неизвестного состава можно применять следующие методы: 1) иммуноэлектрофорез в тех случаях, когда удается идентифицировать полосы преципитации, полученные с иммунной сывороткой (фиг, 31,А); 2) метод Оссермапа в тех случаях, когда исследователь располагает растворами рефереис-белка и соответствующей антисывороткой (фиг. 31, В); 3) метод так называемого истощения (фиг. 3\,Б), который вкратце заключается в следующем.

Исследуемый белковый раствор неизвестного состава инкубируют со специфической иммунной сывороткой; образовавшийся преципитат удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость в качестве «истощенной» иммунной сыворотки используют при иммуноэлектрофорезе известной смеси белков. В полученной иммуноэлектрофореграмме будут отсутствовать именно те компоненты, которые являются общими для исследуемого белкового раствора и для известной смеси белков, так как они удалили из иммунной сыворотки соответствующие антитела.

6. АБСОРБЦИОННЫЙ ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ [3] Принцип метода. После шюктрофоретического . разделения исследуемого белка в агаровом геле компоненты специфической иммунной сыворотки диффундируют навстречу полученным фракциям через слой агарового геля, содержащий известные (контрольные) антигены, которые абсорбируют соответствующие антитела и .задерживают их дальнейшую миграцию к определяемым антигенам. В результате в образовании полос преципитации принимают участие только те антигены исследуемого образца, которые отличаются от контрольных.

Альбумин «1 аг pf fiz у

MILL!

1

Область применения. Этот метод можно использовать для идентификации отдельных компонентов белковых смесей неизвестного состава в том случае, если исследователь располагает соответствующей иммунной сывороткой и смесью контрольных (абсорбирующих) антигенов.

МЕТОДИКА

1. Приготовление агаровой пластинки. На стеклянную пластинку размером 10 х 16 см наносят 40 мл расплавленного 1,5%-ного агара в вероналовом буферном растворе рН 8,2. Затвердевший слой агарового геля разрезают в продольном направлении таким образом, чтобы после удаления лишних участков геля на стекле осталась только полоска шириной 15 мм. Со стороны катода на расстоянии одной трети длины этой полоски геля и на равном расстоянии от ее краев делают лунку для внесения исследуемого образца диаметром примерно 5 мм и заливают в нее 1—2 капли расплавленного агара.

2. Электрофорез. После внесения исследуемого образца проводят электрофорез в течение 7—8 ч при градиенте напряжения ЗВ/см.

3. Нанесение на стекло полосок геля, содержащих абсорбирующие антигены и иммунную сыворотку. По окончании электрофореза рядом с полоской геля, содержащего разделенные антигены, наливают расплавленный агар, смешанный с раствором контрольных (абсорбирующих) антигенов, таким образом, чтобы получилась вторая полоска шириной 5 мм. После затвердения нанесенного агара рядом со второй наносят третью полоску агарового геля, содержащую иммунную сыворотку. В результате на одном стекле оказываются рядом друг с другом три полоски агарового гели, образующие: а) зону специфической иммунной сыворотки, б) зону абсорбирующих антигенов и в) зону электрофоретически разделенных исследуемых антигенов.

4. Регистрация результатов. Образование полос преципитации происходит в течение нескольких дней при 4°С во влажной камере. Их появление можно зарегистрировать, фотографируя нативный или окрашенный препараты (см. стр. 135).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Этот метод весьма полезен, например, при диагностике недостаточности синтеза иммуноглобулинов какого-либо класса. В этом случае электрофоретическому разделению подвергают нормальную сыворотку человека, в зону абсорбирующих антигенов вносят сыворотку больного, а в зону иммунной сыворотки — антисыворотку к сывороточным белкам чело

страница 63
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
corsa-2008
стеклянные столы для кухни фото и цены курск
Металлическая мебель, производство металлической мебели
кремлевский киркоров

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)