химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

льно разрезают на две равные половины и одну из них удаляют. Затем примерно в 5 мм от линии разреза в геле делают лунку для внесения образца, в моторую наливают исследуемый материал, и обычным способом подвергают его электрофорезу. По окончании электрофореза смешивают расплавленный агар со специфической иммунной сывороткой и заливают им свободную половину стекла. Образование преципитатов происходит частично в оставшейся половине агарового геля и частично в геле, нанесенном на стежло после электрофореза. При обычной постановке иммуноэлектрофореза низкомолекулярные белки (например, белки Бенс-Джонса) благодаря быстрой диффузии могут мигрировать на значительное расстояние от лунки и, если они попадут в канавку для ' иммунной сыворотки, полосы преципитации не образуется. Метод Бакхауза позволяет избежать затруднений такого рода, так как в этом случае канавка для иммунной сыворотки просто отсутствует, а полосы преципитации низкомолекулярных белков появляются в слое агарового геля» нанесенном после электрофореза. 6*

12. Метод иммуноэлектрофореза позволяет сравнивать между собой не только смеси белков (антигены) с помощью данной иммунной сыворотки, но также и иммунные сыворотки с помощью данного антигена. Для такого исследования в пластинке агарового геля вырезают две параллельные канавки, а между ними на расстоянии 3 мм от края каждой делают лунку для образца. В нее вносят раствор определенного белка и, проведя электрофорез, заполняют канавки сравниваемыми иммунными сыворотками. Полосы преципитации, которые появляются с обеих сторон от нанесенного образца, позволяют сопоставлять исследуемые иммунные сыворотки.

13. Приготовление иммунной сыворотки требуемого качества нередко встречает серьезные затруднения. Животные-продуценты существенно различаются по способности синтезировать антитела, причем наряду с межвидовыми имеются значительные индивидуальные различия в иммунореактивности животных-продуцентов в пределах одного вида. Поэтому рекомендуется одним антигеном одновременно иммунизировать несколько животных; тем самым повышается вероятность получения антисыворотки хорошего качества, дающей необходимое число полос преципитации.

14. Описанные выше методы иммуноэлектрофореза применимы только для качественного анализа.

15. Разрешающая способность иммуноэлектрофореза намного превышает возможности зонального электрофореза, но не следует забывать, что, подобно другим методам иммунодиффузии, иммуно-электрофорез выявляет минимальное число реагирующих систем антиген—антитело.

16. Если электроэндоосмос в агаровом геле при электрофорезе является серьезной помехой иммуноэлектрофоретического анализа, рекомендуется заменить агаровый гель гелем агарозы.

17. Радиоиммуноэлектрофорез. Если антиген или антитело пометить радиоактивным изотопом, то с помощью иммуноэлектрофореза можно анализировать чрезвычайно малые количества материала. Известно, что антигенные свойства IgG не меняются, если молекула IgG как антитело входит в иммунный комплекс. Если мы располагаем соответствующей иммунной сывороткой анти-IgG, меченной радиоактивным изотопом, то с ее помощью мы можем выявлять IgG в иммунных комплексах (например, в преципитатах). Радиоиммуноэлектрофорез состоит из следующих стадий:

а) Сначала исследуемый антиген (например, сывороточный

альбумин человека) обычным путем подвергают электрофорезу.

Затем заполняют канавку для антисыворотки соответствующей иммунной сывороткой (например, кроличьей антисывороткой к сывороточному альбумину человека) и оставляют для диффузии и

образования полос преципитации.

б) Как только образуются полосы преципитации, канавку для

антисыворотки заполняют меченной 1311 антисывороткой к -у-глобулину кролика (например, полученной от морской свинки) и вновь оставляют для диффузии.'

в) Меченная изотопом иммунная сыворотка реагирует с кроличьим т-глобулином, входящим в состав полос преципитации (иммунных комплексов). Преципитаты, содержащие изотоп, можно затем выявить с помощью радиоавтографии.

Радиоиммуноэлектрофорез можно осуществить также и с помощью антигенов, меченных радиоактивными изотопами. Методика постановки подобна только что описанной, но после иммуноэлектрофореза в канавку для антисыворотки заливают меченный изотопом антиген (в приведенном выше примере — сывороточный 1311-альбумин человека) и оставляют для диффузии.

5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ БЕЛКОВ ПО ОССЕРМАНУ [16]

Принцип метода. Если после иммуноэлектрофореза исследуемой смеси белков в одну из параллельных канавок агаровой пластинки ввести раствор известного белка, а в другую — специфическую антисыворотку к этому белку, то в месте встречи диффундирующих антигенов и антител образуется продольная полоса преципитации. Если исследуемая смесь белков содержит компонент, идентичный известному белку, то соответствующая этому компоненту полоса преципитации по краям сольется с продольной полосой, демонстрируя феномен идентичности по Ухтерлони (см. стр. 131).

Область применения. Если исследователь располагает известными белкам

страница 62
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы профессиональных бухгалтеров в химках
Рекомендуем в КНС Нева картридж Самсунг купить с доставкой по Санкт-Петербургу
оборудование напрокат
кройка и шитье курсы москва недорого

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)