химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ебуется определить присутствие в исследуемой белковой смеси

альбумина, то в качестве контроля используют раствор чистого

альбумина.

б) Для идентификации используются специфические иммунные

сыворотки. Например, присутствие в исследуемой белковой смеси

альбумина можно определить также с помощью специфической

антиальбуминовой иммунной сыворотки. Если смесь белков содержит альбумин, то на иммуноэлектрофореграмме должна появиться

одна полоса преципитации, соответствующая этому белку.

в) Идентификацию фракций можно проводить также с помощью

специфического окрашивания. Например, если требуется определить в смеси белков липопротеиды, полученную иммуноэлектрофореграмму окрашивают красителями, специфически выявляющими липиды. В этом случае должны окраситься только те полосы

преципитации, которые содержат липопротеиды.

9. Методы специфического окрашивания полос преципитации.

Ранее описанные методы окрашивания белков и липопротеидов

вполне пригодны для окрашивания полос преципитации при иммуноэлектрофорезе. Ниже приведено несколько методов специфического окрашивания, которые позволяют идентифицировать

определенные белковые фракции.

а) Окрашивание гликопротеидов [22]. Растворы: I. 1%-ная

йодная кислота в 50%-ном этаноле; II. Смесь 50 мл 0,01 № м-фенилендиамина, 50 мл 0,01 Ma-нафтола и 10 мл 10%-ной перекиси

водорода.

Методика. Высушенную агаровую пластинку на 15 мин погружают в раствор I, затем 15 мин отмывают дистиллированной водой и окрашивают раствором II до появления легкого фиолетового оттенка. После этого препарат 10 мин промывают проточной водопроводной водой и высушивают при 37°С.

б) Окрашивание церулоплазмина. Растворы: I. 200 мг ализарина

голубого растворяют в 100 мл уксусной кислоты при 55°С и разбавляют 70%-ной уксусной кислотой в 10 раз; П. 70%-ная уксусная кислота.

Методика. Высушенную агаровую пластинку 20 мин окрашивают в растворе I, а затем 30 мин отмывают в растворе II.

ё) Окрашивание гаптоглобина. 2,0 г бензидина1 растворяют в 20 мл уксусной кислоты при нагревании. После охлаждения конечный объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 мл, добавляют 0,5—1,0 г активированного угля, встряхивают, оставляют на 15 мин и затем фильтруют в склянку из темного стекла. Непосредственно перед окрашиванием к раствору бензидина добавляют несколько капель перекиси водорода.

После 15 мин окрашивания агаровую пластинку отмывают дистиллированной водой.

10. Форма полос преципитации позволяет судить о гомогенности или гетерогенности исследуемых белков. Гомогенные белки дают симметричные полосы преципитации правильной формы (например, среди сывороточных белков такую полосу преципитации дает альбумин). Гетерогенная популяция молекул обычно дает вытянутую асимметричную полосу преципитации. Это характерно для иммуноглобулинов нормальной сыворотки человека (IgG, IgM, IgA).

1 Бензидин канцерогенен, поэтому работа с ним требует соответствующих мер предосторожности.

Иммуноглобулины разных классов имеют много общих антигенных детерминант, но различаются по электрофоретической подвижности, поэтому они образуют при иммуноэлектрофорезе вытянутую асимметричную полосу преципитации. Особое значение этому явлению придается при диагностике так называемых моно-клональных иммуноглобулинопатий. При этих заболеваниях (например, множественном миеломатозе или макроглобулинемии Вальденштрёма) клон злокачественно пролиферирующих плазматических клеток обычно продуцирует гомогенный монокло-нальный иммуноглобулин. Патологическое увеличение популяции молекул этого иммуноглобулина приводит к тому, что при иммуноэлектрофорезе можно наблюдать характерную симметричную полосу преципитации. На фиг. 29, где представлены иммуноэлектро-фореграммы сыворотки при миеломах IgA- и IgG-типа, можно заметить также, что при значительном увеличении концентрации отдельных белков при моноклон ал ьных иммуноглобулинопатиях происходит растворение полос преципитации в избытке антигена. Это явление может стать причиной неверного толкования иммуно-электрофореграмм, поскольку растворение преципитата воспринимается как отсутствие данной белковой фракции, хотя на самом деле она присутствует в большом избытке. В этих случаях следует устранять избыток антигена 5—10-кратным разбавлением исследуемой сыворотки с высокой концентрацией белка.После этого на иммуно-электрофореграмме должна появиться характерная для монокло-нальных иммуноглобулинопатий симметричная полоса преципитации» отличающаяся от полосы преципитации нормальных иммуноглобулинов (фиг. 29).

11. В отдельных случаях» особенно при иммуноэлекгрофореткческом анализе низЕомолекулярных бачков, удобно применять метод внесения антисыворотки, предложенный Вакхаузом в 1967 г. 12]. После нанесения слоя агарового геля на стеклянную пластинФиг. 29, Иммуноэлектрофорез сыворотки крови при моноклональных иммуноглобулинопатиях.

А. IgG-миелома; Б. IgA-миелома. В верхних лукках — сыворотка больного; в нижняя —

нормальная сыворотка человека.

к у его продо

страница 61
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Фирма Ренессанс: лестницы на второй этаж из металла - оперативно, надежно и доступно!
проект домашнего кинотеатра с проектором
распродажа стендов с перфорацией б/у
кровать corso 1

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.09.2017)