химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

агар затвердеет, пластинки переносят во влажную камеру и хранят в холодильнике. Чаще всего агаровые пластинки готовят за 24 ч до постановки опыта.

Разметку лунок для образцов и канавки для антисыворотки следует делать непосредственно перед электрофорезом, как описано на стр. 141.

4. Внесение исследуемого образца. Раствор исследуемых белков, например сыворотку крови, вносят капиллярной пипеткой в лунку для исследуемых образцов, заполняя ее до края. Для электрофореза достаточно 0,001 мл раствора.

5. Электрофорез. После внесения исследуемых образцов агаровые пластинки помещают в камеру прибора для электрофореза. Контакт агарового геля с буферными ваннами прибора осуществляется с помощью полосок фильтровальной бумаги, смоченных буферным раствором. Бумажные фитили должны примерно на 15 мм покрывать гель на обоих концах агаровой пластинки.

Камеру с агаровыми пластинками закрывают крышкой и включают ток. Если напряжение, измеренное на краях агаровой пластинки, достигает 45 В, то электрофоретическое разделение белков закончится уже через 45—60 мин.

6. Внесение иммунной сыворотки. По окончании электрофореза

ранее размеченную канавку освобождают от агарового геля и при

помощи капиллярной пипетки или туберкулинового шприца заполняют специфической иммунной сывороткой (рекомендуется заранее определить ее оптимальное разведение). Для заполнения канавки требуется примерно 0,05 мл иммунной сыворотки. Диффузия происходит во влажной камере при комнатной температуре в течение 16—24 ч.

7. Регистрация результатов микроиммуноэлектрофореза. Полосы преципитации можно зарегистрировать фотопечатью прямо с нативного препарата (см. стр. 135) или фотографированием после окрашивания (см. стр. 135).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Хорошо себя зарекомендовал прибор для электрофореза в агаровом геле фирмы Labor Muszeripari Mtivek, (Венгрия), тип Labor 59952. В центральной камере этого прибора можно одновременно проводить электрофорез на десяти агаровых пластинках. Прибор продается в комплекте с нивелируемым столиком (который позволяет приготовить равномерный слой агара), кюветами для окрашивания и вкладышами к ним, а также с приспособлением для штампования лунок и канавок в геле и микропипеткой. Прибор не сложен в обращении и с равным успехом может использоваться для электрофореза и иммуноэлектрофореза.

2. При отсутствии специального приспособления для штампования лунок и канавок в агаровом геле можно сделать простой самодельный штамп, укрепив в корковой пробке два лезвия бритвы и пару инъекционных игл (отпилив их острые концы) по размерам, данным на стр. 141.

3. Проще всего спилить острые концы инъекционных игл, вставив мандрен в иглу и обработав конец на вращающемся шлифовальном камне.

4. За процессом электрофоретического разделения сывороточных белков легко следить, окрасив сыворотку крови конго красным. Краситель связывается с альбумином и мигрирует вместе с ним. Следует отметить, что в результате окрашивания скорость миграции альбумина несколько увеличивается.

5. Если концентрация исследуемой смеси белков относительно мала (нижеЗ%), рекомендуется увеличить объем лунки для внесения образца и залить в нее большее количество материала. Проще всего лунки большого размера можно сделать с помощью подходящих стеклянных трубок диаметром 2—4 мм.

6. Делая с помощью штампа на одной агаровой пластинке две лунки для внесения образца, мы получаем возможность одновременно анализировать два разных белка или две разных белковых смеси и сопоставлять их иммуноэлектрофоретические характеристики. Это имеет особое значение при анализе белков сыворотки крови, при котором в одну из лунок помещают исследуемую сыворотку, а в другую — нормальную сыворотку. В этих условиях

легче оценить иммуноэлектрофоретические особенности исследуемой сыворотки. Такой подход весьма целесообразен в том случае, когда необходимо определить, содержит ли исследуемая^ смесь определенный белок. (Например, содержит ли исследуемый тканевой экстракт белки сыворотки крови или какие компоненты сыворотки содержатся в исследуемом препарате белков, выделенном из мочи.)

7, Иммуноэлектрофоретическая характеристика белков сыворотки. Иммуноэлектрофорез применяется для анализа белков сыворотки крови чаще других методов. Его популярность объясняется тем, что, исследуя очень небольшое количество сыворотки, можно охарактеризовать 15—20 белковых фракций вместо 5, доступных для анализа при зональном электрофорезе. Число выявляемых при иммуноэлектрофорезе отдельных белковых фракций зависит от качества используемой антисыворотки.

В верхней части фиг. 28 представлена иммуноэлектрофоре-грамма сыворотки крови человека. С помощью схемы, приведенной ниже, можно ориентироваться в иммуноэлектрофореграммах любой сыворотки человека; на схеме показано относительное расположение белковых фракций, входящих в ее состав.

8. Идентификация отдельных белковых фракций.

а) В одну из лунок вносят в качестве контроля раствор белка

известного состава и подвергают его электрофорезу. Если, например,

тр

страница 60
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
инженер по обслуживанию котельного оборудования обучение
qfa
Этажерки СЛ купить
Стол-книжка ТДН ТО-1Я Гвоздика Трансформер

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.01.2017)