химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ко раз во время'сеанса электрофореза проверять напряжение в цепи.

5. Внесение антител. Во избежание неудачных опытов предварительно следует определить то оптимальное разведение иммунной сыворотки, при котором наблюдается наиболее четкая реакция

преципитации с исследуемым антигеном (в данном случае с белками

сыворотки крови).

По окончании электрофореза фитили из фильтровальной бумаги удаляют, а канавки в агаровом геле заполняют иммунной сывороткой, соответствующим образом разведенной физиологическим раствором. (Для заполнения канавки требуется около 1 мл сыворотки.)

После этого агаровую пластинку помещают во влажную камеру и оставляют до образования полос преципитации, которые появляются в геле через 2—5 дней.

6. Регистрация результатов иммуноэлектрофореза. Полосы

преципитации можно зарегистрировать фотопечатью непосредственно с нативных препаратов (см. стр. 135) либо фотографированием после соответствующего окрашивания (см. стр. 135).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. После каждого сеанса электрофореза рекомендуется менять полюса электродов.

2. Буферный раствор Михаэлиса очень удобен для иммуно-электрофоретического анализа белков сыворотки крови. Однако можно использовать и другие буферные растворы. В этих случаях, разумеется, следует готовить агаровый гель на том же буферном растворе, в котором проводится электрофорез.

МИКРОИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ ПО ШЕЙДИГЕРУ [21]

Приборы, 1. Источник тока (см. стр. 46).

2. Прибор для элекрофореза. Прибор состоит из двух плексигласовых ванн размером 250 х 100 х 35 мм, разделенных перегородкой на два отсека. В наружный отсек каждой ванны вмонтирован платиновый проволочный электрод диаметром 0,5—0,8 мм. Проводниками тока между отсеками служат полоски фильтровальной бумаги, смоченные в буферном растворе и погруженные в него по обе стороны от перегородки.

Между двумя буферными ваннами располагается камера для закрепления агаровых пластинок, также изготовленная из плексигласа. По ее верхнему краю с двух сторон внутри есть выступ шириной 2 мм, на который укладывают предметные стекла с агаровым гелем. Расстояние между краями выступа составляет 76 мм. Камера для агаровых пластинок закрывается плексигласовой крышкой, которая защищает агар от высыхания во время электрофореза. В каждый отсек ванны наливают по 150 мл буферного раствора» который рекомендуется менять перед каждым опытом.

3. Приспособление для вырезания лунок и канавок в агаровом геле. При постановке микроиммуноалектрофореза по Шейдигеру лунки для внесения исследуемых образцов и канавку дня антнсыворотки

вырезают в агаровом геле с помощью специального приспособления. На фиг. 27,Л представлена схема размещения лунок и канавки. Для вырезания канавки (а) в приспособлении (фиг. 27,5) на расемых

зцов (б) и канавки, из коше для вырезания лунок

стоянии 1 мм друг от друга укреплены два стальных лезвия, имеющих размер 5 х 45 х 0,08 мм. Для вырезания лунок (б) на расстоянии 3 мм по обе стороны от внешней поверхности лезвий в приспособлении укреплены два отрезка иглы для подкожных инъекций, также имеющих высоту 5 мм. Эти отрезки игл закреплены не точно по центру штампа, а сдвинуты от него на 5 мм. Предметное стекло, покрытое слоем агарового геля, помещают под штамп приспособления, нажимают закрепленную на пружине рукоятку и, погрузив лезвия с иглами в гель, отмечают контуры канавки и лунок. Отсосав через отрезок иглы соответствующего размера кусочки агарового геля из лунок, в них вносят исследуемые образцы. После этого проводят электрофорез и, только закончив его, удаляют гель из канавки для внесения антисыворотки.

МЕТОДИКА

I. Приготовление буферного раствора. Микроиммуноэяектро-форез обычно проводят в буферном растворе Михаэлиса, имеющем рН 8,2 и ионную силу 0,1 р..

Основной раствор: 194,2 г уксуснокислого натрия и 294,2 г веронала растворяют в 10 л дистиллированной воды.

При разведении основного раствора дистиллированной водой (8 : 9,6) и подведении 0,1 н. HCI рН до 8,2 получается буферный раствор с ионной силой 0,15 JA. Чтобы получить буферный раствор с ионной силой 0,1 р., его следует развести дистиллированной водой в 1,5 раза.

2. Подготовка предметных стекол. Стекла, на которые наносят слой агарового геля, должны быть тщательно вымыты и обезжирены. Их следует мыть серной кислотой, содержащей бихромат калия, затем отмыть от кислоты проточной водопроводной и дистиллированной водой и хранить в этаноле. Перед использованием предметные стекла вытирают насухо, следя за тем, чтобы на поверхности не осталось никаких соринок.

3. Приготовление слоя агарового геля. Сухие предметные стекла помещают на горизонтальную поверхность (см. стр. 138) и с помощью пипетки с достаточно широким выходным отверстием наливают на поверхность каждого стекла 2 мл 1,5%-ного расплавленного агара, приготовленного на буферном растворе (об очистке агара и приготовлении геля см. на стр. 127). Необходимо добиться того, чтобы слой агарового геля был равномерным, покрывал всю поверхность стекла и не содержал пузырьков воздуха. Как только

страница 59
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
hd-проектор за 7000р
Фирма Ренессанс: модульные лестницы для дачи эконом - всегда надежно, оперативно и качественно!
кресло 9930
Предложение от KNSneva.ru SSD диск - метро Пушкинская, Санкт Петербург, ул. Рузовская, д.11.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)