химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

разования полос преципитации поверхность агарового геля промывают дистиллированной водой и помещают препарат, подобно негативной фотопластинке, в фотоувеличитель. Далее поступают точно так же, как при обычной фотопечати. При помощи объектива фотоувеличителя полосы преципитации фокусируют на светочувствительной бумаге. Рекомендуется печатать на контрастной фотобумаге и использовать контрастный проявитель.

Б. Окрашивание полос преципитации. Окрашивание агаровых пластинок не только делает полосы преципитации более заметными, но и повышает точность анализа за счет дополнения его специфическими цветными реакциями. Специальные методы окрашивания позволяют, кроме того, более подробно изучать белки и липопроте-иды.

а) Подготовка агаровой пластинки для окрашивания. После образования полос преципитации производят элюирование из агарового геля тех белков, которые ш участвовали в реакции преципитации. Для этого агаровую пластинку заливают0,9%-ным раствором NaCl и проводят элюирование в течение 48 ч, 2—3 раза в день меняя элюирующую жидкость.

После элюирования агаровый гель сверху покрывают листом фильтровальной бумаги соответствующего размера, смоченным дистиллированной водой, и высушивают в термостате при 37°С. После полного высушивания агаровой пластинки покрывающую ее фильтровальную бумагу отклеивают, смочив несколькими каплями дистиллированной воды, и затем окрашивают сухую пленку агара в той же чашке Петри, в которой была поставлена реакция.

б) Окрашивание белка амидовым черным. Окрашивающий раствор:

0,1 г амидового черного 10В растворяют в 100 мл смеси уксусная

кислота — метанол (1 : 9).

Отмывающий раствор: смесь уксусная кислота—метанол (1 : 9).

Перед окрашиванием на высушенную агаровую пластинку наливают 10%-ную уксусную кислоту и оставляют ее на 10 мин. Затем уксусную кислоту сливают и на 60 мин заливают препарат раствором амидового черного. После этого краситель сливают, а избыток его удаляют отмывающим раствором, меняя этот раствор каждые 15 мин, пока он не будет оставаться бесцветным.

в) Окрашивание белков кислым фуксином. Окрашивающий раствор: 2,0 г кислого фуксина растворяют в 500 мл метанола, добавляют 400 мл дистиллированной воды и 100 мл уксусной кислоты.

Дифференцирующий раствор: 500 мл метанола смешивают с 400 мл дистиллированной воды и 100 мл уксусной кислоты.

Отмывающий раствор: 10%-ная уксусная кислота.

Перед окрашиванием агаровые пластинки обрабатывают 10 мин 10%-ной уксусной кислотой.

После 30 мин окрашивания окрашивающий раствор сливают и агаровую пластинку заливают дифференцирующим раствором. Затем препарат обрабатывают отмывающим раствором, меняя его каждые 15 мин, пока не прекратится элюирование красителя.

г) Окрашивание белков азокармином. Окрашивающий раствор:

0,5%-ный раствор азокармина в смеси метанол—уксусная кислота

(9 : 1).

Отмывающий раствор: смесь метанол—уксусная кислота (9 : 1). Время окрашивания: 60 мин. При отмывании следует менять отмывающий раствор каждые 15 мин.

д) Окрашивание белков пунцовым S. Окрашивающий раствор:

0,15%-ный раствор пунцового S в 3%-ной трихлоруксусной кислоте.

Отмывающий раствор: 5%-ный раствор уксусной кислоты. Время окрашивания: 60 мин. При отмывании следует менять отмывающий раствор каждые 15 мин.

е) Окрашивание липопротеидов Суданом черным. Основной раствор красителя: 500 мг судана черного ВВ растворяют в 500 мл

метанола. До использования основной раствор красителя следует не

менее недели выдержать в темном месте.

Окрашивающий раствор: 100 мл основного раствора красителя смешивают со 180 мл метанола и 120 мл дистиллированной воды. Передокрашиванием раствор фильтруют через бумажный фильтр. После 60 мин окрашивания пробы отмывают водопроводной водой.

ж) Окрашивание липопротеидов жировым красным. Окрашивающий раствор: 0,5%-ный раствор жирового красного в 50%-ном

этаноле.

Отмывающий раствор: 50%-ный этанол.

Время окрашивания: 2 ч. Отмывающий раствор следует менять каждые 15 мин.

4. ИММУН0ЭЛЕКТР0Ф0РЕЗ

Принцип метода. Иммуноэлектрофорез представляет собой комбинацию электрофоретического разделения белков с двойной диффузией и иммунопреципитацией в геле. Вслед за электрофорети-ческим разделением белков в агаровом геле навстречу полученным фракциям диффундирует специфическая иммунная сыворотка. Этот метод позволяет характеризовать белки не только по скорости миграции в электрическом поле, но и по антигенным свойствам.

Область применения. С помощью иммуноэлектрофореза производится идентификация компонентов белковых смесей, прежде всего сыворотки крови. Он весьма полезен при диагностике пара-протеинемий и иммунодефицитных диспротеинемий. Этим методом осуществляется контроль чистоты белковых препаратов (определение примесей), а также анализ белков из тканей и жидкостей организма.

Наибольшее распространение получили два варианта этого метода: 1) макрометод Грабара — Вильямса [8, 9] и 2) микрометод в модификации Шейдигера^[21], популярность которого объясняется быстротой осуществления и возможностью

страница 57
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кресло крутящееся офисное
вентилятор winp 70-40/31-2d
григорий лепс купить билеты
убирание вмятин на автомобиле без покраски цена

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.07.2017)