химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

м разведении, то образование полос преципитации происходит через несколько дней.

2. Полосы преципитации, как правило, располагаются в том участке геля, в котором создается оптимальное соотношение концентраций антигена и антител. При относительно большем разведении антисыворотки реакция преципитации происходит вблизи границы агара, содержащего иммунную сыворотку. Если же используются относительно разбавленные растворы антигена, реакция преципитации наблюдается ближе к границе агарового слоя, содержащего антиген. В соответствии с этим располагаются полосы преципитации.

3. Положение полос преципитации можно охарактеризовать величиной р, которая выражает в процентах отношение расстояния между нижней границей агарового слоя, содержащего антиген, и полосой преципитации ко всей длине промежуточного слоя агара, который первоначально не содержал ни антигена, ни антител.

4. Метод одномерной диффузии в агаре удобен главным образом для качественного анализа. По числу образующихся полос преципитации можно судить о минимальном числе разных антигенных компонентов, которые реагируют с антителами соответствующей специфичности в данной системе.

3. МЕТОД ДВУМЕРНОЙ ДВОЙНОЙ ДИФФУЗИИ В ГЕЛЕ ПО УХТЕРЛОНИ [17]

Принцип метода. Растворы антигена и иммунной сыворотки диффундируют навстречу друг другу в плоском слое агарового геля. В месте встречи антигена и антитела образуется преципитат.

Область применения. Метод позволяет непосредственно сравнивать различные белки (антигены) или специфические иммунные сыворотки. Он используется для выявления определенных белков в белковых смесях, для определения антигенной идентичности, общности или различий между белками.

ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

1. Чашки Петри.

2. Металлические кубики с гранью размером 10 мм.

3. Набор штампов для вырезания лунок в агаровом геле.

МЕТОДИКА

/. Очистка агара и приготовление геля (см. стр. 127).

2. Приготовление агаровой пластинки. Обычно реакцию ставят

в плоском слое агарового геля, затвердевшего на дне чашки Петри.

Сначала внутреннюю поверхность чашки Петри покрывают агаровой пленкой. Для этого ее наполняют 0,1 %-ным расплавленным агаром, затем сразу же агар выливают, а чашки переносят в эксикатор

для полного высушивания. Другой вариант подобной процедуры

состоит в том, что покрывают дно чашки Петри слоем 1%-ного

расплавленного агара толщиной примерно 1 мм. В качестве консерванта в агар следует добавить мертиолат.

В подготовленные чашки Петри наливают расплавленный в физиологическом растворе 1%-ный агар, содержащий 0,1% мертио-лата, таким образом, чтобы получился слой толщиной 3—4 мм. В приготовленном слое агарового геля делают лунки для внесения исследуемых образцов.

3. Приготовление лунок. Лунки в слое агарового геля для внесения исследуемых образцов можно сделать двумя способами:

а) В чашку Петри, покрытую изнутри пленкой агара, помещают

три металлических кубика с гранью 10 мм, расставив их на расстоянии 1 см один от другого, как показано на фиг. 23. Затем в чашку

наливают расплавленный агар, образующий слой толщиной 3 —

6 мм, и помещают ее в холодильник. После затвердения агара и удаления металлических кубиков в слое агарового геля остаются лунки, точно соответствующие форме и размерам кубиков.

б) Для приготовления лунок цилиндрической формы применяют

специальные штампы или стеклянные трубки соответствующего

диаметра. Осторожно надавливая, их вертикально погружают в агаровый гель в нужном месте, стараясь не повредить соседние участки геля. Вырезав контуры лунок, штампы или стеклянные трубки извлекают, а вырезанные столбики агара удаляют, отсасывая их при слабом вакууме иглой большого диаметра.

4. Внесение исследуемых образцов, учет реакции преципитации. Исследуемый материал (растворы антигенов, иммунные сыФиг. 23. Схема размещения исследуемых образцов в агаровом геле при постановке реакции преципитации по Ухтерлони [17] (подробное описание см. в тексте).

воротки) заливают в приготовленные лунки в агаровой пластинке.

Если необходимо провести сравнение двух белковых растворов или двух смесей белков, их вносят в две верхние лунки (/ и II на фиг. 23), а специфическую иммунную сыворотку — в нижнюю (///).

После внесения образцов в агар следует обеспечить достаточную влажность в чашке, чтобы предотвратить его высыхание. Легче всего это сделать, поместив отрезок увлажненной фильтровальной бумаги на внутреннюю поверхность крышки, закрывающей чашку Петри.

Чашки с агаром можно оставить при комнатной температуре или перенести в холодильник. Их следует ежедневно просматривать, отмечая появление полос преципитации. В зависимости от условий опыта срок наблюдения может ограничиться сутками или же продлиться несколько дней, а то и недель.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Внесенные образцы диффундируют в геле равномерно по всем

направлениям, и в тех участках геля между лунками, где возникает

оптимальное соотношение концентраций антигена и антител, образуется полоса преципитации.

2. Оценка резуль

страница 55
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
сковорода тефаль джейми оливер
выправка авто без покраски омск
металлические каркасы для стеллажей
обучение наращивание гелевых ногтей

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)