химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

0°С в течение примерно 12 ч. После охлаждения чашку Петри вновь взвешивают и вычисляют концентрацию агара в отмытом геле. (Если, например, чашка Петри до внесения 10 мл агара весила 50,0 г, а после высушивания в ней агара весит 50,5 г, то, следовательно, внесенный раствор агара имел концентрацию 5%.) Зная эту величину, отмытый агар расплавляют и 0,9%-ным раствором NaCl доводят до нужной концентрации, прибавив в качестве консерванта 0,01% мертиолата.

3. Нанесение агара на внутреннюю поверхность пробирок. Чтобы покрыть внутреннюю поверхность пробирок тонким слоем агара, их заполняют 0,1%-ным расплавленным агаром с помощью капиллярной пипетки и сразу же после заполнения агар сливают. Агаровые пленки высушивают, поместив пробирки в эксикатор.

4. Постановка реакции. 0,6%-ный агар, расплавленный в физиологическом растворе, охлаждают до температуры 46*—48°С и смешивают с равным объемом иммунной сыворотки, нагретой до этой же температуры. С помощью капиллярной пипетки расплавленную смесь агара и антисыворотки вносят в пробирки, покрытые изнутри сухой агаровой пленкой, избегая образования пузырьков воздуха. Столбик агара в пробирке должен иметь высоту около 4 см.

Когда агар затвердеет, на его поверхность с помощью капиллярной пипетки наслаивают раствор антигена, заполняющий пробирку на высоту 2—3 см, заливают парафином и оставляют при комнатной температуре.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Через определенный промежуток времени антиген диффундирует в агар. В условиях относительного избытка антигена в агаре образуется полоса преципитации, которая медленно мигрирует от границы, разделяющей агар и раствор антигена, в нижние слои агара. Миграция полосы обусловлена диффузией антигена в агаровом геле, в результате которой постепенно увеличивается концентрация антигена между полосой преципитации и верхней границей агарового слоя, т. е. выше так называемого фронта преципитации. С увеличением концентрации антигена происходит не только продвижение фронта преципитации вниз, но также и растворение преципитата у верхнего края полосы.

2. Расстояние между фронтом преципитации и верхней границей агарового слоя (h) пропорционально квадратному корню из величины, характеризующей промежуток времени от момента наслоения раствора антигена до момента учета |преципитации (t). Эта зависимость позволяет рассчитать скорость миграции (k) фронта преципитации согласно следующему уравнению:

Это же уравнение позволяет, кроме того, провести количественный анализ растворов неизвестных антигенов. При низком соотношении антиген — антитело концентрации антител а и антигена g связаны следующей зависимостью:

h , g h а

= т lg — и —-— = a lg — •

Vt so Yt ao

где gQ м a0 — значения g и а при yj- = 0, а у и а представляют

собой коэффициенты, соответственно большие и меньшие нуля. Таким образом, скорость миграции фронта преципитации k прямо пропорциональна логарифму концентрации антигена g и обратно пропорциональна логарифму концентрации антител а.

Величина k возрастает с увеличением температуры и уменьшается с увеличением концентрации агара. При резких изменениях температуры могут появляться неспецифические преципитаты^ которые, однако, не мигрируют.

Величину h выражают обычно в мм и измеряют ежедневно.

2. МЕТОД ДВОЙНОЙ (ОДНОМЕРНОЙ) ЛИНЕЙНОЙ ДИФФУЗИИ В ГЕЛЕ [15, 20]

Принцип метода. Раствор белкового антигена и иммунная сыворотка диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу и образуют преципитат.

Область применения. Определение минимального числа компонентов в белковых смесях.

ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

1. Пробирки длиной 60—80 мм и внутренним диаметром 2—3 мм2. Капиллярные (пастеровские) пипетки.

МЕТОДИКА

/. Очистка агара и приготовление геля (см. стр. 127). 2. Нанесение агаровой пленки на внутреннюю поверхность пробирок (см. стр. 128).

3. Постановка реакции. При помощи капиллярной пипетки смесь расплавленного агара и иммунной сыворотки наливают на высоту —20 мм в пробирки, покрытые изнутри агаровой пленкой.

Приготовление смеси агара с иммунной сывороткой. Расплавленный в физиологическом растворе 0,6%-ный агар охлаждают до температуры 46—48°С и смешивают с равным объемом подогретой до этой же температуры иммунной сыворотки.

После того как внесенная в пробирки смесь агара и антисыворотки затвердеет, сверху наносят 0,3%-ный расплавленный агар на высоту 8—10 мм. Как только затвердеет и этот слой, на него наслаивают смесь расплавленного агара с раствором антигена на высоту 20 мм.

Приготовление смеси агара с раствором антигена. Расплавленный 0,6%-ный агар при температуре 46—48°С смешивают с равным объемом раствора антигена.

Пробирки, заполненные тремя слоями агара, заливают парафином и оставляют при комнатной температуре.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При использовании антисыворотки с высоким титром уже через несколько часов после постановки реакции в промежуточном слое агара появляется одна или несколько полос преципитации. Если используемая антисыворотка имеет низкий титр антител или применяется в большо

страница 54
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
продукция гранд лайн
заказать рекламный плакат
выравнивание крыльев на авто цена в костроме
где делают анализы на определение наркотиков в ногтях

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.09.2017)