химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ывать. После удаления надосадочной жидкости центрифужные пробирки перевертывают вверх дном и ставят вертикально на фильтровальную бумагу.

К осадку добавляют 0,5 мл охлажденного 0,9%-ного раствора NaCl и энергично встряхивают пробирку, суспендируя преципитат. Затем тем же раствором (2,5 мл) смывают частички преципитата со стенок пробирки (общий объем пробы будет 3 мл). Суспендированный преципитат вновь центрифугируют при 2000 об/мин, надоса-дочную жидкость сливают, а отмывание повторяют еще раз.

4. Растворение преципитата. К дважды отмытому преципитату добавляют несколько капель дистиллированной воды и 1 каплю 0,5 М раствора NaOH. После растворения преципитата в полученном растворе определяют содержание азота одним из соответствующих методов.

5. Определение зоны эквивалентности. Чтобы определить, в какой из пяти пробирок реакция преципитации действительно проходила в зоне эквивалентности, в надосадочной жидкости каждой пробы (1) определяют избыток антигена или антител, добавляя соответственно иммунную сыворотку или раствор антигена (см. стр. 120).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Преципитация обычно максимальна в тех пробирках, надосадочная жидкость (I) которых содержит небольшой избыток

антигена. Можно определить количество азота антител в исследуемой антисыворотке, если вычесть известное количество азота антигена из количества азота в преципитате такой пробы. Результаты обычно выражают количеством азота антител в 1 мл иммунной сыворотки.

2. Результаты количественной реакции преципитации можно

выразить графически, построив кривую зависимости количества

азота преципитата от количества добавляемого антигена. Полученную кривую можно разделить на три части. Первая часть кривой — зона избытка антител. В соответствующих пробирках комплексы антиген — антитело образуют преципитат, который осаждается центрифугированием, а в надосадочной жидкости можно

обнаружить свободные молекулы антител. Вторая часть кривой

(ее вершина) — зона эквивалентности. Надосадочная жидкость в

соответствующих пробирках не содержит ни свободного антигена,

ни свободных антител. Третья часть кривой — зона избытка антигена; надосадочная жидкость в соответствующих пробирках содержит несвязанные молекулы антигена. С увеличением количества

добавляемого антигена количество азота преципитата начинает

уменьшаться. Дальнейшее увеличение концентрации антигена может привести к еще большему растворению преципитата вплоть

до полного перехода его в раствор.

3. Необходимые для постановки этой реакции количества антигена и антисыворотки зависят от чувствительности выбранного

метода определения белка. Так, например, при использовании

микрометода Кьельдаля в модификации Маркхема вполне достаточно, чтобы иммунная сыворотка содержала 75—125 мкг азота

антител. При использовании биуретовой реакции требуется вдвое

большее содержание азота антител. В то же время, если белок определять спектрофотометрически, в реакции может участвовать половина указанного количества антител, а при определении методом Фолина — Чиокальтеу или нингидриновой реакцией достаточно одной трети этого количества. В соответствии с этим объем иммунной сыворотки в центрифужной пробирке может варьировать от 0,5 до 4,0 мл.

4. Во избежание денатурации белков рекомендуется использовать центрифугу с охлаждением.

В. АНАЛИЗ БЕЛКОВ МЕТОДАМИ ДИФФУЗИИ В ГЕЛЕ

1. МЕТОД ПРОСТОЙ ЛИНЕЙНОЙ ДИФФУЗИИ В ГЕЛЕ

ПО УДЕНУ [18, 19]

Принцип метода. Растворимый антиген диффундирует в агаровом геле, содержащем иммунную сыворотку. В том участке геля, где возникает его относительный избыток, в агаре образуется полоса преципитации.

Область применения. Определение концентрации растворимых белковых антигенов. Определение минимального числа антигенных компонентов, выявляемых данной антисывороткой в смеси белков.

ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

1. Пробирки длиной 60—80 мм и диаметром 2—3 мм.

2. Капиллярные (пастеровские) пипетки.

МЕТОДИКА

1. Очистка агара. Для реакции следует использовать очищенный агар хорошего качества. Если агар не достаточно очищен, рекомендуется обработать его следующим образом.

30,0 г агара, обычно используемого для приготовления питательных сред, растворяют в 400 мл нейтральной дистиллированной воды, нагревая в кипящей водяной бане, и, как только агар растворится, выливают раствор в кювету. После охлаждения затвердевший агар разрезают на небольшие кубики, которые в течение 3 дней промывают проточной водопроводной водой, а в следующие 3 дня — нейтральной дистиллированной водой. Дистиллированную воду следует менять не реже двух раз в день. Отмытые кубики агара вновь расплавляют в конической колбе, нагревая на водяной бане, разливают по флаконам и хранят до использования в холодильнике.

2. Приготовление агарового геля. Перед использованием отмытого агара в нем определяют содержание сухого вещества. Для этого, тщательно взвесив чашку Петри, в нее наливают 10 мл расплавленного агара. После затвердения агар высушивают в сушильном шкафу при 10

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
цена сафит в челнах
авито шашки из под такси
установка пламягасителя chevrolet
парковая скамья из трубы профильной

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)