химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

шивают с 0,5 мл иммунной сыворотки. В зависимости от активности антисыворотку можно применять либо неразведенной, либо в разведении 1 : 2 или 1 : 4. Смесь инкубируют 60 мин при 37°С и оставляют до следующего дня в холодильнике. Образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 1500 об/мин 10 мин и в надосадочной жидкости определяют оставшийся антиген или антитела, как описано на стр. 120. Проба, в которой надосадочная жидкость не содержит ни антигена, ни антител, позволяет обнаружить зону эквивалентности.

Для более точного выявления зоны эквивалентности следует надосадочную жидкость из пробирок, расположенных рядом с той, которая указывает на зону эквивалентности, дополнительно исследовать с более дробными разведениями антигена.

4. РЕАКЦИЯ КОЛЬЦЕПРЕЦИПИТАЦИИ (РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ НА ГРАНИЦЕ СЛОЕВ, СОДЕРЖАЩИХ АНТИГЕН И АНТИТЕЛА)

Принцип метода. Если наслоить раствор антигена на специфическую антисыворотку, то на границе раздела двух слоев происходит реакция преципитации.

Область применения. Определение титра антител в иммунных сыворотках.

ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

1. Стеклянные (преципитационные) пробирки длиной 35 мм

и диаметром 2,5 мм.

2. Капиллярные (пастеровские) пипетки.

МЕТОДИКА

/. Приготовление серийных разведений антигена (см. стр. 121).

2. Постановка реакции. На дно преципитационных пробирок капиллярной пипеткой вносят по 0,04 мл исследуемой иммунной сыворотки. Затем, держа пробирки наклонно, в каждой из них капиллярной пипеткой наслаивают на сыворотку примерно 0,04 мл антигена из серии соответствующих разведений.

3. Инкубация и учет результатов реакции. Пробирки оставляют в холодильнике и на следующий день учитывают результаты реакции.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При положительной реакции на границе раздела между слоями антигена и иммунной сыворотки появляется беловатое опалес-цирующее кольцо, видимое невооруженным глазом. В случае интенсивной реакции преципитации это кольцо появляется уже через несколько минут, и фрагменты преципитата могут осесть на дно пробирки.

2. Кольцо преципитата занимает в пробирке строго горизонтальное положение, не изменяя его даже, если пробирку осторожно наклонить. По этому признаку преципитат можно отличить от неспецифического осадка, положение которого при наклоне пробирки будет изменяться.

3. Кратность разведений антигена определяется той точностью, с которой должен быть определен титр антител; можно приготовить десяти-, пяти-, трех- и двукратные разведения антигена.

4. При учете результатов реакции удобно просматривать пробирки на темном фоне, так как в этом случае кольца преципитата лучше видны.

5. Как и в других методах титрования преципитинов,титром реакции, кольцепреципитации считается то наибольшее разведение антигена, при котором еще образуется кольцо преципитата.

6. Основное преимущество этого метода титрования антител заключается в том, что для реакции требуется небольшое количество реагентов. Диффузия растворов антигена и антител происходит довольно медленно, поэтому в реакции кольцепреципитации в меньшей степени, чем в других реакциях, выражен растворяющий эффект избытка антигена.

7. К недостаткам реакции кольцепреципитации следует отнести меньшую воспроизводимость по сравнению с вышеописанными методами, а также то, что с ее помощью нельзя определить количественного соотношения антигена и антител.

5. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ ПО ХАЙДЕЛЬБЕРГЕРУ [12]

Принцип метода. Если реакция преципитации происходит в зоне эквивалентности, то, определив азот преципитата, можно вычислить соотношение реагирующих компонентов. Вычитая из количества азота преципитата известное количество азота антигена, можно вычислить количество азота антител в исследуемой иммунной сыворотке.

Область применения. Определение азота антител в исследуемых иммунных сыворотках с помощью раствора антигенов известной концентрации. Определение концентрации белковых антигенов при помощи антисывороток с известной концентрацией азота антител.

МЕТОДИКА

/. Определение оптимального соотношения антиген — антитело. Зону эквивалентности антиген —антитело определяют в предварительных экспериментах (см. стр. 123).

2. Постановка реакции, инкубация. Определив зону эквивалентности, в 5 центрифужных пробирок наливают по 1 мл исследуемой иммунной сыворотки и добавляют раствор антигена в возрастающих концентрациях. Концентрация добавляемого антигена должна быть известна из предварительных опытов. Антиген и иммунную сыворотку осторожно перемешивают, вращая каждую пробирку между ладонями, инкубируют 1 ч при 37°С и на 24 ч оставляют в холодильнике.

3. Центрифугирование и отмывание преципитата. После того как реакция преципитации закончится, образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 2000 об/мин в течение 60 мин.

Надосадочную жидкость (I) осторожно сливают, следя за тем, чтобы в нее не попали фрагменты преципитата. Если нет уверенности в том, что преципитат достаточно хорошо осел, надосадочную жидкость следует не сливать, а отсас

страница 52
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
компрессор для мячей 220в
кинотеатр инсталляции
столовая посуда купить в москве
правильная реклама такси

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)