химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

повторять эту процедуру, добавляя возрастающие количества антигена (0,1; 0;3; 1,0 мл и т. д.).

5. Центрифугируя реакционную смесь при положительной реакции преципитации, можно удалить образовавшийся преципитат и определить, какой из ;вух компонентов системы, антиген или антитело, остался в надосадочной жидкости. Тем самым удается выяснить, в избытке какого компонента проходила реакция. Для этого половину надосадочной жидкости смешивают с равным объемом иммунной сыворотки, а к другой половине добавляют возрастающие количества раствора антигена (см. предыдущий раздел). Образование преципитата в первом случае свидетельствует об избытке антигена, во втором — об избытке антител. Подобным образом можно определить оптимальное соотношение антиген — антитело для положительной реакции преципитации.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА ПРЕЦИПИТИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ ПО РАЗВЕДЕНИЮ АНТИГЕНА

Принцип метода. При внесении в специфическую иммунную сыворотку растворимого белкового антигена происходит реакция преципитации. Количество преципитирующих антител в неразведен-ной или в разведенной в 10 раз антисыворотке можно охарактеризовать тем наибольшим разведением антигена, которое еще способно вызвать реакцию преципитации с данной сывороткой; это разведение называется титром преципитинов.

МЕТОДИКА

/. Приготовление серийных разведений антигена. В зависимости от того, сколько сыворотки имеется в распоряжении исследователя, готовят серию двукратных, четырехкратных или десятикратных разведений антигена. При подготовке серии двукратных разведений антигена в штатив помещают 16 вассермановских пробирок; в первую наливают 0,5 мл неразведенного антигена, а во все остальные — по 0,5 мл 0,9%-ного раствора NaCl. Во вторую пробирку вносят 0,5 мл неразведенного антигена и после перемешивания 0,5 мл смеси переносят пипеткой в третью пробирку.

Смешав содержимое третьей пробирки, 0,5 мл переносят в четвертую и т. д. до конца ряда. Из последней пробирки отбирают 0,5 мл и выбрасывают. Таким образом получается серия разведений раствора антигена от исходного до разведенного в соотношении 1 : : 32 768. (Меняя аликвоты растворов антигена и хлористого натрия, можно подобным образом приготовить серии разведений другой кратности.)

2. Добавление иммунной сыворотки. В каждую пробирку с раствором разведенного антигена добавляют равные объемы неразве-денной или разведенной в 10 раз иммунной сыворотки.

3. Контрольные пробы. Контроль I: 0,5 мл иммунной сыворотки смешивают с равным объемом 0,9%-ного раствора NaCl. Контроль II: 0,5 мл 0,9%-ного раствора NaCl смешивают с равным объемом раствора антигена.

4. Инкубация и учет результатов реакции. Перемешав растворы, пробирки инкубируют при 37°С в течение 60 мин, затем

их переносят в холодильник и учитывают результаты реакции на

следующий день. Титром преципитинов считается то наибольшее

разведение антигена, при котором еще образуется преципитат с

исследуемой иммунной сывороткой.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Иммунные сыворотки, которые готовят для иммунохими-ческого анализа белков, должны преципитировать соответствующие белковые антигены, разведенные не менее чем в соотношении 1 : 10 000 — 50 000.

2. Недостаток данного метода заключается в том, что требуются относительно большие количества исследуемого материала. Если исследователь располагает небольшими количествами антигена или антисыворотки, можно уменьшить объемы компонентов системы до 0,2 мл или воспользоваться другим методом, требующим меньших количеств компонентов.

3. Для успешного проведения ряда иммунохимических исследований необходимо, чтобы реакция преципитации осуществлялась в так называемой зоне эквивалентности, т. е. при оптимальных количественных соотношениях антигенов и антител, вступающих в реакцию. С помощью метода разведений, описанного выше, эту зону можно определить следующим образом. Готовят ряд двукратных разведений иммунной сыворотки в объеме 0,2—0,5 мл и в каждую пробирку вносят равный объем раствора антигена в том разведении, при котором еще происходит реакция преципитации. Пробирки инкубируют при 37°С в течение 60 мин, оставляют на ночь в холодильнике и учитывают реакцию на следующий день.

При этом определяют наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще образуется преципитат со взятым по титру антигеном. Считается, что в этих условиях реакция преципитации протекает в зоне эквивалентности.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗОНЫ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ РЕАКЦИИ

АНТИГЕН—АНТИТЕЛО

Принцип метода. Определяют те количества антигена и иммунной сыворотки, которые без остатка вступают в реакцию преципитации после их перемешивания, так что надосадочная жидкость после отделения осадка не содержит ни антигена, ни антител.

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137).

МЕТОДИКА

Готовят серию двукратных разведений раствора антигена известной концентрации (см, стр. 121). 0,1 мл раствора антигена каждого разведения сме

страница 51
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
съемные петли для межкомнатных дверей
MT А1235
максвелл вакансии москва
курсы делопроизводителся

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)