химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

определяют активность антисыворотки в иммуноэлектрофорезе. При необходимости эту процедуру повторяют. Если через 2—3 нед после повторной иммунизации специфическая активность антисыворотки окажется недостаточной, то делают дополнительные еженедельные внутримышечные инъекции 5—10 мг белкового антигена без адъюванта до тех пор, пока титр антител не достигнет нужной величины.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Приготовление геля гидроокиси алюминия. Растворы: а) 11,0 г

сернокислого аммония растворяют в дистиллированной воде,

доводят конечный объем раствора до 300 мл и подогревают до 63°С;

б) 38,35 г алюминиево-калиевых квасцов растворяют в 500 мл дистиллированной воды и подогревают раствор до 58°С.

Раствор сернокислого аммония смешивают с раствором квасцов (1 : 2), с помощью NaOH доводят рН полученной смеси до 6,5, затем нагревают до 61°С и оставляют при этой температуре на 10 мин. Как только закончится образование и оседание хлопьев, смесь центрифугируют и осадок трижды отмывают дистиллированной водой, в которую добавлено несколько капель аммиака. Отмытый осадок суспендируют в дистиллированной воде до нужной концентрации.

2. После того как в ходе иммунизации активность сыворотки,

которую измеряют, отбирая пробы, достигнет нужной величины,

животным-продуцентам делают кровопускание для получения максимального количества сыворотки. Если иммунная сыворотка получена в нестерильных условиях, в нее рекомендуется добавить мертиолат в соотношении 1 : 5000. При хранении в холодильнике

(по возможности в замороженном состоянии) активность полученных антисывороток может сохраняться в течение нескольких лет.

Если курс иммунизации животного-продуцента не закончился тотальным кровопусканием, то через некоторое время ему можно сделать повторную «напоминающую» инъекцию антигена в той же дозе и тем же способом, а через 7—9 дней можно взять кровь и получить иммунную сыворотку.

3. Иммунная сыворотка, используемая в реакциях преципитации, должна иметь титр антител не менее 1 : 10 000.

Б. АНАЛИЗ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ РЕАКЦИИ

ПРЕЦИПИТАЦИИ

1. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ

Принцип метода. При смешивании растворимого белкового антигена со специфической иммунной сывороткой наблюдается образование преципитата.

Область применения. Выявление специфических антител

и выявление при помощи специфической иммунной сыворотки белковых антигенов, взятых в качестве иммунизирующего материала.

МЕТОДИКА

В зависимости от имеющегося в распоряжении количества иммунной сыворотки ее разливают в пробирки по 0,1— 0,5 мл. В каждую пробирку вносят равный объем раствора антигена — в первую пробирку неразведенный, а в последующие с возрастающим разведением (1 : 2, 1 : 4, 1 : 8, 1 : 16 и т. д.). После перемешивания растворов пробирки инкубируют в водяной бане при 37°С 60 мин. Если сыворотка достаточно активна, то уже на этом этапе появляются ясно различимые преципитаты. После инкубации пробирки оставляют до следующего дня в холодильнике. При использовании слабых иммунных сывороток преципитаты можно обнаружить после центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 мин.

Контроль I: к 0,1—0,5 мл 0,9%-ного раствора NaCl добавляют равное количество раствора антигена так же, как в опытной пробе.

Контроль II : к 0,1—0,5 мл иммунной сыворотки добавляют 0,9%-ный раствор NaCl в том же объеме, в каком добавляли антиген в опытной пробе.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Реакция считается положительной, если в пробирке образуется преципитат. В случае известной иммунной сыворотки это указывает на присутствие соответствующего белкового антигена; в случае известного белкового антигена — на присутствие специфических антител в исследуемой антисыворотке.

2. Реакция считается отрицательной, если преципитат не образовался. Это может означать, что : 1) в исследуемой системе отсутствует антиген, к которому специфична применяемая антисыворотка; 2) в антисыворотке отсутствуют антитела к данному антигену; 3) в системе имеется избыток антигена, растворяющего преципитат. Чтобы избежать ошибочной оценки реакции из-за растворения преципитата в избытке специфического антигена, следует к одному и тому же объему антисыворотки прибавлять раствор антигена с возрастающим разведением или постепенно уменьшать его количество.

3. В принципе для образования видимого преципитата достаточно, чтобы в реакции участвовало 0,1—0,5 мг азота антител. При меньшем количестве антител преципитат можно еще выявить, отцентрифугировав реакционную смесь. Однако если количество азота антител меньше 0,01 мг, то реакция преципитации не происходит.

4. Если в распоряжении исследователя имеется ограниченное количество иммунной сыворотки, то реакцию преципитации можно поставить следующим образом. В центрифужную пробирку вносят 0,1—0,5 мл этой сыворотки, затем к ней добавляют 0,01 мл раствора антигена, перемешивают и оставляют на 30 мин при 37°С. Если преципитат не образуется, к реакционной смеси добавляют еще 0,03 мл раствора антигена и продолжают инкубацию еще 30 мин. В ожидании появления преципитата можно и дальше

страница 50
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
камины leeds 23sd
заказ лимузина на свадьбу цены
клапан противопожарный нормально открытый квп-60-но цена
светодиодный даунлайт 40w

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.02.2017)