химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

животному вводят раствор антигена, содержащий 25 мг белка; в последующие 3 дня вводят еще по 20 мг белка в ушную вену. На 7—9-й день после последней инъекции у животного берут кровь, получают сыворотку и определяют титр антител [11].

Б. Курс иммунизации длится 4 нед. Однократная доза составляет 1—2 мл 1%-ного раствора белкового антигена. На первой неделе в первые три дня делают по одной инъекции в ушную вену. В каждую из последующих трех недель в первый день иммунизируют внутрибрюшинно, а на второй и третий — внутривенно. Через неделю после иммунизации берут кровь, получают сыворотку и определяют титр антител.

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации: по Мильгрому и по Проому.

Сначала кроликов иммунизируют по Мильгрому. Для этого из ушной вены животного берут 2 мл крови, смешивают с 0,5 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия, осаждают эритроциты и трижды отмывают их пятью объемами физиологического раствора хлористого натрия. К осадку отмытых эритроцитов прибавляют два объема инактивированной сыворотки человека группы АВ и, периодически помешивая, инкубируют смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем эритроциты вновь трижды отмывают, доводят объем суспензии физиологическим раствором до 2 мл и вводят в вену тому же самому кролику. Эти инъекции повторяют каждые 3 дня, пока титр антиглобулиновых антител не достигнет 1: 1000—2000 в реакции пассивной гемагглютинации с эритроцитами Rh (D) + , сенсибилизированными неполными анти-О-антите-лами с титром 1 : 32.

Как только титр антиглобулиновых антител достигает указанной величины, иммунизацию продолжают по схеме Проома. Для этого белки человеческой сыворотки адсорбируют на алюминиево-калиевых квасцах; 25 мл стерильной сыворотки разбавляют 80 мл дистиллированной воды и к полученному раствору прибавляют 90 мл 10%-ного раствора алюминиево-калиевых квасцов. С помощью 5 н. NaOH подводят рН раствора до 6,5. Образовавшийся осадок собирают центрифугированием и, отбросив надосадочную жидкость, дважды промывают его 200 мл физиологического раствора, содержащего мертиолат (I : 10 000). Конечный объем суспензии доводят до 100 мл физиологическим раствором и хранят при +4°С не более 14 дней. По 5 мл этой суспензии вводят животным внутримышечно в область бедра 2—3 раза с интервалом в 14 дней. На 9— 10-й день после последней иммунизации у животных берут кровь.

За процессом иммунизации можно следить иммуноэлектрофоре-тически, исследуя образцы, получаемые во время очередной инъекции антигена.

2. СХЕМЫ ИММУНИЗАЦИИ С АДЪЮВАНТАМИ

А. Адсорбция антигена на гидроокиси алюминия: адсорбция белкового антигена на геле гидроокиси алюминия значительно увеличивает его иммуногенность.

В нашей лаборатории гидроокись алюминия используется при иммунизации кроликов для получения антисыворотки к сывороточным белкам человека (например, для иммуноэлектрофоретических исследований). Ниже описывается способ получения антисыворотки.

Приготовление антигена заключается в смешивании следующих компонентов: 6,25 мл сыворотки человека (берется смесь сывороток нескольких доноров), 12,5 мл 0,9%-кого раствора NaCl, 5,0 мл геля гидроокиси алюминия, 1,25 мл 5%-ного раствора фенола. 2,5 мл этой смеси вводят внутримышечно животным в два места раз в неделю в течение 6 нед. Через неделю после последней инъекции у кролика берут кровь и определяют титр антител. Если титр сыворотки еще не достиг необходимой величины или если с ее помощью нельзя выявить желаемого числа антигенных компонентов, еженедельные инъекции повторяют до получения нужного эффекта.

Б. Существенную помощь при получении антисыворотки оказывает адъювант Фрейнда [7]. Необходимое количество белкового антигена (например, 500 мг овальбумина) растворяют в 10 мл физиологического раствора хлористого натрия, содержащего 1% фенола. К раствору антигена добавляют 10 мл одного из имеющихся в продаже эмульгаторов, производных ланолина (аквафор фирмы Duke Lab., фальба фирмы Pfaltz and Bauer Inc. N. Y.; безводный ланолин), и смешивают их в гомогенизаторе Уоринга. К полученному гомогенату добавляют 20 мл жидкого парафина, содержащего 50 мг равномерно суспендированных лиофилизированных микобак-терий туберкулеза, убитых нагреванием. После повторной гомогенизации 1 мл полученной смеси, подогретой перед инъекцией до 37°С, вводят животным внутримышечно или подкожно трижды с недельным интервалом.

В продаже имеются готовые препараты полного и неполного адъюванта Фрейнда. Весьма хорошо себя зарекомендовала следующая схема иммунизации белковыми антигенами. 0,1—1,0 мг антигена растворяют в 0,25—0,5 мл физиологического раствора хлористого натрия и гомогенизируют с равным объемом полного адъюванта Фрейнда. Эмульсию вводят внутримышечно в четыре места. Спустя 3—4 нед у животного берут кровь и

страница 49
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить разноцветные хризантемы москва
Рекомендуем фирму Ренесанс - лестница на мансарду купить - качественно и быстро!
кресло престиж серый
В магазине KNSneva.ru купить телефон онлайн в кредит - более 10 лет на рынке, Санкт-Петербург, Пушкинская, ул. Рузовская, д.11.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)