химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

енты, за исключением пепсина, оптимум действия которого находится при кислом рН. Частичный кислотный гидролиз в данном случае также не пригоден. После ферментативного гидролиза проводят препаративный электрофорез, затем вырезают полоску для аналитического диагонального электрофореза и помещают ее в вакуумный эксикатор. Если анализируется малеини-рованный белок, то в эксикаторе находится буферный раствор, состоящий из 1%-ного пиридина и 5%-ной уксусной кислоты; в эксикаторе создается вакуум и его помещают на 16 ч в термостат при 60°С. Если анализу подвергается цитраконилированный белок, то в эксикаторе содержится 0,05 М уксусная кислота, и после создания вакуума его помещают в термостат при 37°С на 6 ч. После инкубации полоски высушивают, пришивают к новым листам фильтровальной бумаги и подвергают электрофорезу в направлении, перпендикулярном первоначальному. При отщеплении ацильных групп происходит регенерация аминогрупп, имеющих заряд -\-\. Поскольку блокирующая карбоксильная группа имела заряд —1,

то после удаления блокирующего агента происходит суммарное увеличение заряда на +2 единицы. Такое изменение заряда приводит к весьма значительному смещению пептидов, содержащих лизин, в сторону катода [2, 4].

5. ВЫДЕЛЕНИЕ С-КОНЦЕВОГО ПЕПТИДА ИЗ ТРИПТИЧЕСКОГО

ГИДРОЛИЗАТА БЕЛКОВ [8]

Благодаря специфичности триптического гидролиза возникающие в ходе его пептиды имеют на С-конце лизин или аргинин, за исключением С-концевого пептида самого белка (если, конечно, на его С-конце не находится ни лизин ни аргинин). Карбокси-пептидаза В специфически отщепляет С-концевые основные аминокислоты, что приводит к потере зарядов в концевых пептидах. Если пептид не имеет на С-конце ни лизина, ни аргинина, т. е. действительно является С-концевым пептидом белка, то после обработки карбоксипептидазой он не потеряет своего заряда.

Исследуемый белок гидролизуют трипсином и гидролизат подвергают электрофорезу на бумаге. Ориентируясь по контрольной полоске, вырезают полоску для аналитического диагонального электрофореза и осторожно опрыскивают ее карбоксипептидазой В, растворенной в 0,1%-ном бикарбонате аммония. Опрысканную полоску на 1 ч помещают в эксикатор, содержащий воду, при 37°С. После инкубации полоску высушивают и подвергают вновь электрофорезу под прямым углом к первоначальному направлению.

Все пептиды, у которых на С-конце находится лизин или аргинин, смещаются от диагонального положения, в котором остается только С-концевой пептид исследуемого белка.

В. МЕТОД ВЫСОКОВОЛЬТНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

При высоковольтном электрофорезе градиент напряжения равен 50—100 В/см. Сила используемого тока также увеличивается, а следовательно, возрастает теплообразование и повышается температура бумаги. Для рассеяния образующегося тепла необходимо более эффективное охлаждение.

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить

5—439 равномерное давление на бумагу, ее приходится покрывать слоем пенопласта, но в этом случае теряется охлаждающий эффект одной из плит. Те части бумажного листа, которые выступают за пределы охлаждающей плиты, вовсе не охлаждаются. Поэтому,, например, фитиль из фильтровальной бумаги, погруженный в электродный отсек, должен быть двухслойным, чтобы быстро компенсировать потерю буферного раствора при нагревании и не допускать высыхания бумаги.

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой; тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование «хвостов» при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием «хвостов», обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести.

Хорошая охлаждающая жидкость не должна смешиваться с водой, должна иметь высокую теплоемкость и высокую температуру вспышки. Высыхание бумаги во время электрофореза вызывает увеличение электрического сопротивления в цепи, что в свою очередь может привести к ис

страница 47
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы по 1с производство
схема проезда северянинский мост проспект мира222
стул mn milano молочный
маленький раскладной столик

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)