химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

а из них содержит компоненты, локализующиеся диагонально; в данном случае они не представляют для нас интереса. Другая зона располагается ближе к аноду, чем первая. Именно в ней находятся пептиды, содержащие цистеиновую кислоту, причем чаще всего в достаточно гомогенном виде.

При ферметативном гидролизе дисульфидная связь между двумя остатками цистеина, образующими дисульфидный мостик, может разорваться еще до воздействия надмуравьиной кислотой. Дисульфидный мостик может также связывать две разные цепи друг с другом. В этих случаях после разрушения дисульфидных связей при диагональном электрофорезе можно обнаружить два смещенных компонента.

2. ВЫДЕЛЕНИЕ ПЕПТИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ МЕТИОНИН [11]

Полипептидные цепи можно избирательно разрушить по остаткам метионина с помощью бромциана. Разумеется, анализ полученной смеси не позволит восстановить последовательность фрагментов в исходной полипептидной цепи. Однако такого рода избирательное расщепление оказывает существенную помощь в изучении первичной структуры. Если определить небольшое число остатков с N- и С-концов бромциановых пептидов и если после ферментативного или химического гидролиза удается выделить пептиды, содержащие метионин, и затем определить их аминокислотную последовательность, то на основании всех этих данных можно расположить в правильном порядке все фрагменты пептидной цепи, полученные при расщеплении бромцианом.

Пептиды, содержащие метионин, можно выделить методом диагонального электрофореза. В основе метода лежит специфическая реакция метионин а с иодацетамидом в кислой среде; в результате образуется карбамоилметилсульфониевая соль метионина (КМ-метионин).

В этой реакции происходит окисление серы и суммарный заряд пептида изменяется на -f-1 единицу:

СН3 СН3

S -4—СНа—СО—NHa

[ +I-CH2—СО—NHZ I

СН2 СН2

I I

СН2 СН2

—NH—СН—СО- —NH-—СН—СО—

Методика диагонального электрофореза аналогична процедуре, проиллюстрированной на фиг. 22. Неполный гидролизат, содержащий пептиды с метионином, подвергают электрофорезу. После окрашивания контрольной полоски вырезают аналитическую элек-трофореграмму, смачивают ее 0,1 М раствором иодацетамида в пиридин-ацетатном буферном растворе с рН 3,5 [пиридин—уксусная кислота—вода (1 : 10 : 90)]. Смачивание производят осторожно распылителем или пипеткой. Необходимо, чтобы бумага пропиталась полностью, но не содержала избытка влаги. Влажную полоску на 14—16 ч помещают в эксикатор при комнатной температуре. На дно эксикатора наливают буферный раствор рН 3,5 для создания соответствующей атмосферы. Необходимо следить, чтобы в эксикаторе части бумажной полоски не соприкасались друг с другом. После инкубации электрофореграмму высушивают на воздухе и избыток иодацетамида удаляют отмыванием в ацетоне, 3—4 раза погружая в него полоску. Сухую полоску пришивают к новому листу фильтровальной бумаги и подвергают электрофорезу, используя тот же самый буферный раствор, который применялся при первом электрофорезе, но проводя разделение под прямым углом к первоначальному направлению. Пептиды, содержащие метионин, благодаря изменению суммарного заряда на +1 единицу сместятся в сторону катода от диагонали, по которой располагаются другие пептиды.

Последовательность аминокислот, выделенных таким путем в пептидах, содержащих КМ-метионин, можно анализировать затем обычными методами. Кроме того, можно произвести избирательное расщепление таких пептидов. Если их в течение 2 ч инкубировать при 100°С в запаянной ампуле, произойдет расщепление по остаткам метионина с превращением их в гомосерин или в гомосерин-лактон.

3. ВЫДЕЛЕНИЕ ПЕПТИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГИСТИДИН

При рН 6,0 остатки гистидин а в полипептидных цепях специфически реагируют с диэтилпирокарбонатом, в результате чего они превращаются в остатки карбэтоксигистидина [7]. Образовавшийся остаток карбэтоксигистидина не может быть протонирован, т. е. карбэтоксилирование сопровождается потерей заряда этим остатком. В щелочной среде карбэтоксильная группа освобождается и вновь появляется гистидин. Это обратное превращение карбэтоксигистидина в гистидин приводит к увеличению суммарного заряда молекулы на- + 1 единицу. Реакция карбэтоксилирования в первую очередь имеет значение при анализе остатков гистидина, играющих прямую или косвенную роль в функционировании нативных белков. Использование этой реакции в диагональном электрофорезе позволяет выделить из ферментативного гидролизата такого белка пептиды, имеющие в своем составе модифицированные остатки гистидина.

Исследуемый белок растворяют в фосфатном буферном растворе рН 6,0 и, добавляя свежеприготовленный раствор диэтилпи-рокарбоната в этаноле, проводят карбэтоксилирование. Соотношение гистидин/диэтилпирокарбонат должно составлять 1 : 10. Рассчитанное, исходя из этого соотношения, количество диэтил-пирокарбоната разбавляют в 5 раз этанолом. После инкубации в течение 1 ч, во время которой, кроме карбэтоксилирования, происходит также разрушение избытка диэтилпирокарбоната, раствор белка необходимо обессолить гель-фил

страница 45
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
установка клапана 3х ходового серии 3f
учебные курсы по холодильной технике пермь
удалить царапины на бампере автомобиля
матрасы гранд

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(12.12.2017)