химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

бходимо проверить правильность закрепления крышки. Под недостаточно прижатой или искривленной крышкой бумага становится неравномерно смоченной, так как высыхает в некоторых участках, а это может быть причиной подобных аномалий. Если крышка закреплена хорошо, но тем не менее эти явления не исчезают, следует проверить правильность укладки полосок целлофана. При слишком коротких целлофановых прокладках фильтровальная бумага с одной или с обеих сторон может контактировать непосредственно с фитилем. Это вызовет усиленный поток буферного раствора в месте контакта и как следствие этого — нарушение формы зон. При высо106

Глава 111

ковольтном горизонтальном электрофорезе эффект электроэндоосмо-са менее выражен, поэтому можно обходиться без целлофановых прокладок.

3. При анализе методом «отпечатков пальцев» рекомендуется хроматографию так же, как и электрофорез, проводить при низкой температуре, если это возможно. Исходя из нашего опыта, можно отметить, что самая высокая разрешающая способность наблюдается при -f-4°C.

Б. МЕТОД ДИАГОНАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Некоторые боковые группы аминокислотных остатков могут быть модифицированы в специфических реакциях и в результате у них может измениться заряд. Большая часть таких реакций может быть проведена с аминокислотами и пептидами, адсорбированными на бумаге.

Благодаря специфичности этих реакций изменение заряда касается только тех пептидов, которые имеют в своем составе определенную аминокислоту. Поэтому само явление изменения заряда можно использовать для выделения пептидов, содержащих соответствующие аминокислоты из такой многокомпонентной смеси, как ферментативный белковый гидролизат.

1. ВЫДЕЛЕНИЕ ПЕПТИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ ЦИСТИН [1]

Белок, содержащий цистин и, следовательно, имеющий дисуль-фидные связи, подвергают ферментативному гидролизу. Следует подобрать такой фермент, который обеспечит получение мелких пептидов, т. е. расщепит цепь во многих точках. Наименее пригоден для этой цели трипсин из-за высокой избирательности действия, а также из-за хорошо известной устойчивости белков, содержащих дисульфидные связи, к триптическому гидролизу.

Сначала полученный гидролизат подвергают препаративному электрофорезу на бумаге, например при рН 6,5. Закончив электрофорез, бумагу высушивают и окрашивают контрольную полоску / (фиг. 22,Л). Ориентируясь по ней, определяют месторасположение тех компонентов гидролизата, которые мигрировали на наибольшее расстояние от линии старта в сторону катода и анода, и в соответствии с этим вырезают полоску 2 шириной 1 см. Ее помещают в эксикатор, содержащий надмуравьиную кислоту [смесь перекись водорода — муравьиная кислота (1 : 5)], и создают вакуум. Через 2 ч инкубации при комнатной температуре полоску переносят в другой вакуумный эксикатор с NaOH и удаляют пары надмуравьиной кислоты. Затем сухую полоску пришивают к новому листу (фиг. 22,Б) на том же расстоянии от края бумаги, на

котором находилась стартовая зона при первом электрофорезе. Бумагу смачивают тем же самым буферным раствором (рН 6,5) и проводят электрофоретическое разделение в направлении, пер пенА

® In©

Гисф |и

Неишр. (А

• %

I и—

Щ % 1 о

К

Цис S03H |

r,.,g

в

г

Фиг. 22. Диагональный электрофорез пептидов, содержащих цистин.

А. Препаративный электрофорез при рН 6,5. Б. Электрофорез в перпендикулярном направлении фракций, содержащихся в полоске 2 после окисления. В. Определение локализации компонента X, сместившегося при электрофорезе в сторону от диагонали. Г. Препаративный диагональный электрофорез.

дикулярном первоначальному. Закончив электрофорез, электрофореграмму целиком окрашивают нингидрином.

Несколько упрощая, предположим, что при гидролизе остались нетронутыми пептидные связи, соединяющие два соседних остатка цистеина, и получился один пептид, имеющий внутренний дисуль-фидный мостик:

SВ результате окисления надмуравьиной кислотой (НМК) этот ди-сульфидный мостик разрушается и возникают две сильнокислотные группы:

—S нмк —S03H

I — '

—S ~S03H

Появление таких групп означает увеличение отрицательного заряда на 2 единицы. При втором электрофоретической разделении пептид, изменивший свой отрицательный заряд на две единицы, займет положение компонента X (фиг. 22,/5), более близкое к аноду по сравнению с другими, не изменившими своих зарядов компонентами смеси, располагающимися по диагонали. Диагональное расположение всех остальных пептидов обусловлено тем, что, не изменив заряда, они сохранили также неизменной свою подвижность относительно друг друга.

Проведя аналитический диагональный электрофорез, определяют локализацию зоны компонента X на препаративной электро-фореграмме и вырезают участок, содержащий искомую фракцию 3 (фиг. 22,В). Этот отрезок бумаги точно так же, как и аналитическую электрофореграмму, обрабатывают надмуравьиной кислотой, затем пришивают к новому листу бумаги и подвергают электрофорезу при рН 6,5 (фиг. 22,Г). На окрашенной контрольной полоске обычно можно обнаружить две зоны. Одн

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
что такое муниципальное жилье
автосигнализации москва купить
купить магнитный держатель для ножей
если не включается пульт от гироскутера

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)