химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

лько нейтральные аминокислоты. Обе оставшиеся части листа, обозначенные цифрой 6, окрашивают нингидрином и идентифицируют содержащиеся в них кислые и основные аминокислоты путем сопоставления с контрольными элек-трофореграммами. Полоску бумаги, содержащую нейтральные аминокислоты, на швейной машине зигзагообразным швом пришивают к новому листу фильтровальной бумаги.

Следующий этап электрофореза проводится в буферном растворе, имеющем рН 1,9 или 2,0. Поэтому полоску бумаги с нейтральными аминокислотами нужно пришить на анодном краю листа так, чтобы она служила стартовой зоной. При рН 1,9—2,0 диссоциация всех карбоксильных групп аминокислотных молекул подавлена, и в связи с этим все нейтральные компоненты смеси ведут себя как катионы. Пришив полоску бумаги, лист переворачивают и лезвием бритвы осторожно вырезают тот его участок, который расположен под пришитой полоской. Это необходимо делать осторожно, чтобы не повредить швы и саму полоску. Затем фильтровальную бумагу смачивают буферным раствором, имеющим рН 1,9 или 2,0, как описано выше. В качестве маркера рядом с пришитой полоской наносят г-ДНФ-лизин. Электрофорез проводят до тех пор, пока этот маркер не мигрирует на 8—10 см по направлению к катоду.

По окончании электрофореза бумагу вновь высушивают, вырезают одну из контрольных полосок 7 (фиг. 19,5) и окрашивают ее. С ее помощью можно определить, как далеко мигрировали нейтральные аминокислоты. Установив это, разрезают электрофореграмму (по пунктирным линиям) на полоски, содержащие нейтральные аминокислоты из образцов 1—3, а также из контрольного образца К- Каждую из этих полосок в свою очередь пришивают к новому листу фильтровальной бумаги и подвергают хроматограФиг. 20, Пептидная карту триптическсго и:дролизата D-глнщеральдегйд-Зфосфатдегцдрогеназы.

фи и в системе бутанол — уксусная кислота — вода (фиг, 19,Г) в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Такая трежэтапная система анализа позволяет -надежно идентифицировать каждую из аминокислот, содержащихся в исследуемом гидролизате.

Гвдролизаты коротких пептидов, в составе которых имеются аминокислоты, ошого-двух видов, можно анализировать по сокращенно! программе, проводя вместо трехэтапного двухэтапное разделение.

7. Диализ ферментативных гидролизатов белков. В 1957 г. Ипгрэм 161 впервые показал, что двухэтапным разделением с. помощью хроматографии и электрофореза на бумаге можно анализировать сложные пептидные смеси, ферментативные гидролизаты и т. п. Такой анализ выявляет самые незначительные различия, с которыми можно встретиться, например, при изучении видовой специфичности или в других сравнительных исследованиях. Метод «отпечатков пальцев» можно назвать одним из важнейших методов современной биохимии, молекулярной биологии и иммунохимии, так как он позволяет выделить в чистом виде определенный пептид или провести микропрепаративное, разделение сложной смеси.

В качестве классического примера метода «отпечатков пальцев» на фиг. 20 приведена картина, полученная в результате фракционирования триптического гидролизата П-глицеральдегид-З-фос-фатдегидрогеназы.

иметь весьма варьирующую электрофоретическую подвижность. Анализ неизвестной смеси пептидов следует начинать с предварительного электрофоретического опыта, который позволит установить эти параметры.

После электрофоретического разделения на первом этапе контрольную полоску 1 (фиг. 21,Л) окрашивают и, используя ее как образец для сравнения, из неокрашенной части бумажного листа вырезают полоску 2 шириной примерно 1 см (фиг. 21,Л). Эту полоску пришивают на новый лист бумаги для второго электрофоретического разделения (фиг. 21,5), которое обычно проводят при рН 2,1 или 1,9. При рН 1,9 нельзя ожидать полного разделения ферментативных белковых гидролизатов из-за сложного состава зоны 3 нейтральных аминокислот. Поэтому, установив месторасположение этой зоны на первой электрофореграмме, ее вырезают и пришивают рядом с полоской 2 (фиг. 21,Б). Электрофорез продолжается до тех пор, пока нанесенный в качестве маркера е-ДНФ-лизин не продвинется примерно на 10—13 см в сторону катода. После высушивания бумагу окрашивают почти целиком, за исключением полоски 4 (фиг. 21,Б), которая содержит мигрирующие из отрезка 3 нейтральные компоненты. Полоску 4 пришивают к новому листу и подвергают хроматографии в соответствующей системе (фиг. 21, В). Трехэтапный анализ позволяет с наибольшей достоверностью установить количество пептидных компонентов, возникающих в результате ферментативного гидролиза высокомолекулярных белков. Такого рода данные чрезвычайно важны, например, при определении аминокислотной последовательности.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Чем меньше буферного раствора содержится в фильтровальной бумаге, тем выше разрешающая способность горизонтального электрофореза. Поэтому перед нанесением образца следует особенно тщательно удалять избыток буферного раствора промоканием.

2. Если образуются зоны неправильной формы с краевой деформацией или если фронт миграции не параллелен электродам, нео

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
фото с проектором
Рекомендуем компанию Ренесанс - купить винтовую лестницу на второй этаж недорого- быстро, качественно, недорого!
кресло 993
Самое выгодное предложение от магазина компьютерной техники КНС Нева - Canon i-SENSYS MF628Cw предоставив доставку по Санкт-Петербургу

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)