химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ушивания!). Достаточно проделать это три раза, чтобы в области нанесения образца установился рН буферного раствора. После этого избыток буферного раствора отжимают между слоями фильтровальной бумаги и кладут лист на охлаждающую плиту.

Подобное смачивание буферным раствором следует применять и при использовании приема «пришивания». Буферный раствор пипеткой наносят вдоль шва по обе стороны пришитого отрезка бумаги, пока оба фронта смачивания не сомкнутся. При этом содержащийся на пришитом отрезке бумаги материал будет впитываться на чрезвычайно узкой области «старта». Таким путем можно сконцентрировать материал на полоске шириной до 10—15 см. На бумагу Ватман 3 или 3 ММ можно нанести от 1 до 5 жг/см, а на бумагу Ватман 1 — от 1 до 5 мг на 10 см. В методе «отпечатков пальцев» на бумагу Ватман 3 и 3 ММ на линию старта шириной 1 см можно наносить максимально 3—4 мг исследуемого материала.

4. Электрофорез. После нанесения образца бумагу помещают в прибор, крышку плотно закрывают и включают ток. Для эффективного охлаждения очень важно, чтобы бумага была достаточно плотно прижата к охлаждающей плите. При использовании приема «пришивания» покрывающую стеклянную или плексигласовую пластинку 2 (фиг. 15,Л) нельзя непосредственно приложить к бумаге, так как в местах, где пришиты полоски электрофореграммы, имеются утолщения. В этом случае между фильтровальной бумагой и покрывающей пластинкой прокладывают слой пенопласта, который нивелирует неровности и обеспечит равномерное прижатие бумаги. Разумеется, слой пенопласта следует изолировать от бумаги тонкой полиэтиленовой пленкой или же можно поместить пенопластовую прокладку в полиэтиленовый мешок. Электрофорез продолжается 90—120 мин, после этого прибор выключают, открывают крышку, стеклянными палочками вынимают влажную электрофореграмму и сушат ее в потоке теплого воздуха при 40—50°С.

5. Окрашивание электрофореграммы. В аналитическом варианте мотода высушенную электрофореграмму погружают в 0,5%-ный ацетон-нингидриновый или кадмий-нингидриновый раствор (см. стр. 192) и затем сушат 2—3 ч при 40—50°С.

Когда электрофорез ставят в препаративном варианте, на элек-трофореграмме окрашивают только края зон, как показано на фиг. 17. Согласно этим окрашенным полоскам, размечают остальные части электрофореграммы и проводят элюирование фракций.

После окрашивания электрофореграмм ацетон-нингидрино-вым раствором их необходимо зафиксировать. Для приготовления фиксатора смешивают 10 мл водного насыщенного раствора CuN03t 0,2 мл азотной кислоты и 200 мл ацетона и полученную

смесь фильтруют. Окрашенную электрофореграмм у погружают в этот фиксатор и затем высушивают на воздухе.

6. Качественное разделение аминокислотных смесей. Разделение и идентификацию всех аминокислот в полных кислотных гидро-лизатах белков и пептидов нельзя провести, используя лишь один

107- ХА

i ХА-2 »

i ХА-З

Фиг. 17. Электрофореграмма, на которой показано, как нужно отрезать край листа с разделенными фракциями для микропрепаративного выделения.

Отрезанную полоску окрашивают; руководствуясь ею, делают соответствующую разметку и проводят элюирование фракций.

имеющим рН 6,5, а анодную пропитывают буферным раствором с рН 5,0 (фиг. 18).

Нейтральные аминокислоты не разделяются ни в одном из этих буферных растворов, но их фракционирование можно осуществить при последующем электрофорезе в других условиях, а также с помощью хроматографии. Перенос фракции нейтральных аминокислот в другую систему очень удобно сделать путем пришивания (фиг. 19). Для полной идентификации аминокислот гидролизаты наносят на сухую фильтровальную бумагу. Чем меньше площадь, которую занимает нанесенный образец на бумаге, тем лучше будет

А Б

~рН6,5

• •

• •

• © •

+ + +

К 1 2 3 К

• ® •

• •

Фен ТирЬ

Тре

К—

ЬЛей

"Иле

Вал

Про • Ала

Сер

ос

г

Фиг. 19. Трехэтапное разделение аминокислот.

А я Б. Электрофорез в системе с двумя буферными растворами. В. Электрофорез при

рН 1,9. Г. Хроматография.

разделение. Поэтому, чтобы уменьшить растекание образца, нанесение сопровождается подсушиванием. В центре листа бумаги размечают линию старта и через 3 см друг от друга наносят исследуемые образцы 1,2 и 3 (фиг. 19,Л). По обе стороны от них наносят по два контрольных образца (К). На первом этапе анализа проводят электрофорез с двумя буферными растворами. Катодную часть электрофореграммы смачивают буферным раствором, имеющим рН 6,5, а анодную — рН 5,0. Средневольтный электрофорез проводят около 1,5 ч, затем электрофореграмму извлекают из аппарата, сушат и с двух сторон отрезают полоски фильтровальной бумаги, на которых фракционировались контрольные образцы. Эти полоски 4 окрашивают нингидрином (фиг. 19,Л). На окрашенных контрольных электрофореграммах можно идентифицировать кислые и основные аминокислоты исследуемых гидролизатов и установить локализацию нейтральных аминокислот. Из исходной электрофореграммы по пунктирным линиям (фиг. 19,Б) вырезают полоску 5, содержащую то

страница 42
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кондиционирование обучение курсы
купить зеркало орден зеркало солнце москва
стенки под плазму
люк чугунный типа л (а15)-в 1-55

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.01.2017)