химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

аждающей жидкости внутри плиты направляется особыми перегородками. В качестве такой жидкости применяют 50%-ный этанол, охлаждаемый в специальном резервуаре смесью льда с ацетоном или с помощью холодильного агрегата. Температура охлаждающей плиты должна быть примерно -f6° С. На плиту кладут смоченный буферным раствором лист фильтровальной бумаги, соединенный с электродными отсеками прибора бумажными фитилями, покрытыми целлофаном. Сверху лист фильтровальной бумаги закрывают пластинкой из плексигласа толщиной 15 мм, которая в трех точках плотно прижимается к охлаждающей плите.

1 +

Электродный отсек аппарата представляет собой прямоугольную

камеру из плексигласа, разделенную на две части. В наружной

части расположен электрод, изготовленный из платиновой проволоки 0,3 мм толщины; во внутреннюю часть погружаются фитили,

соединяющие отсек с фильтровальной бумагой. Обе части электродного отсека соединяет мостик из влажной фильтро- g ю

вальной бумаги.

Источник тока снабжен плавным реостатом и обеспечивает максимально напряжение 2000 В и силу тока 150—200 мА.

Охлаждающая жидкость циркулирует в системе под действием небольшого насоса.

2. Приготовление буферных растворов. 1) Буферный раствор рН 4,3—

5,0 (величина рН определяется чистотой уксусной

кислоты): смешивают 10 мл

уксусной кислоты и 10 мл

пиридина и разводят дистиллированной водой до

1000 мл.

А. 1— охлаждающая плита (см. Б); 2 — пластинка, которая служит крышкой; 3 — лист фильтровальной бумаги; 4 — целлофановая мембрана; 5— фитиль из фильтровальной бумаги; 6 — мостнк из фильтровальной бумаги; 7 — электродный отсек; 8 — держатели охлаждающей плиты; 9 — деталь крепления; 10 — полоска губчатой резины, 11— платиновые электроды.

2) Буферный раствор

рН 6,5: смешивают 100 мл

пиридина и 4 мл уксусной

кислоты и разводят дистиллированной водой до

1000 мл.

3) Буферный раствор

рН 2,0: смешивают 100 мл

уксусной кислоты и 35 мл

муравьиной кислоты и

разводят дистиллированной водой до 1000 мл.

3. Обработка фильтровальной бумаги. На листе фильтровальной

бумаги делают необходимую разметку и смачивают его соответствующим буферным раствором. Осторожно отжав избыток буферного

раствора между несколькими слоями фильтровальной бумаги, этот

лист накладывают на охлаждающую плиту. Затем, прикрыв сухим

листом бумаги, распрямляют его резиновым валиком, используемым

в фотографических лабораториях. На обращенные к электродам

концы листа фильтровальной бумаги накладывают полоски целлофана, длина которых несколько превышает ширину листа. Целлофановую полоску сгибают таким образом, чтобы она сверху и снизу охватывала конец бумажного фитиля (фиг. 16), который другим своим концом погружается в буферный раствор.

При нанесении слишком большого объема исследуемого материала может произойти его размывание на линии «старта». Для предотвращения размывания следует наносить небольшой объем достаточно концентрированного раствора пептидов.

Фиг. 16. Укладка фильтровальной бумаги в приборе для горизонтального электрофореза.

Чтобы предотвратить слишком интенсивный электроэидоосмотический поток буферного раствора, фильтровальная бумага (1) контактирует с фитилем (3) через целлофановую мембрану (2).

Если приходится фракционировать значительный объем материала, желательно наносить его на сухую, а не на влажную бумагу. Большой объем наносимого материала, естественно, пропитывает значительную площадь бумаги. Если подсушивать место «старта», можно частично ограничить растекание наносимого раствора. Правда, в этом случае создается опасность необратимой адсорбции некоторых пептидов на бумаге; особенно это относится к большим пептидам, и поэтому такого подсушивания следует избегать. Однако, если область старта действительно занимает слишком большую площадь, наносимый материал можно сконцентрировать следующим способом. Сразу после нанесения образца бумагу кладут на чистое стекло. Увлажненную область «старта» с помощью двух стеклянных палочек приподнимают так, чтобы она не касалась стекла. Продвигая кончик пипетки параллельно линии «старта» примерно на расстоянии 1 см от увлажненной области, смачивают буферным раствором бумагу вокруг нее. Буферный раствор должен свободно выходить из пипетки и впитываться в бумагу. Увлажнение повторяют несколько раз по обе стороны стартовой зоны, пока она полностью не пропитается буферным раствором. После этого смачивают всю остальную площадь листа фильтровальной бумаги. Очень важно, чтобы нанесенный материал в стартовой области имел рН используемого буферного раствора. Особенно это существенно в тех случаях, когда лиофилизированный образец наносится в растворе аммиака. Поскольку этот раствор имеет более высокое значение рН, чем обычно используемый буферный раствор, важно, чтобы последний был достаточно емким. Обеспечить нужный рН в месте нанесения образца можно довольно простым приемом. Для этого бумагу вокруг стартовой зоны смачивают буферным раствором и оставляют для легкого подсушивания ( но не полного выс

страница 41
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кухонные ножницы
выпрямить дверь на машине цена
куплю стол трансформер b 2208
курсы по excel на дмитровской

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)