химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

тношении 1 : 2 : 4 : 1. Если готовят гель для заполнения всех

12 трубок, то каждая часть соответствует 3,5 мл.

в) Раствор мономеров для получения крупнопористого геля

(рН 6,8). Смешивают растворы Бк, Гк, Дк и дистиллированную воду

в соотношении 1:2:1:4. Во избежание спонтанной полимеризации

после добавления раствора Дк следует предохранять смесь от света.

Если необходимо заполнить все 12 трубок прибора для диск-электрофореза, то одна часть соответствует 0,4 мл.

г) Электродный буфер (рН 4,5). К 62,4 г (3-аланина (х. ч.)

прибавляют 16,0 мл уксусной кислоты (х. ч.) и доводят объем дистиллированной водой до 2 л.

д) Окрашивающий и отмывающий растворы. Используются те

же растворы, что и для щелочной системы анализа (см. стр. 90).

Колонку геля готовят точно так же, как и для щелочной системы анализа. Затем на ее верхнюю часть пипеткой наносят 0,2 мл раствора мономеров, предназначенного для приготовления крупнопористого геля. Еще выше осторожно наслаивают 5—8 мм разбавленного в8раз раствора Бк. После этого трубки стелем 15—20мин освещают электрическими лампами мощностью 400—500 Вт на расстоянии 15—20 см до наступления полимеризации, о чем можно судить по появлению опалесценции геля. Жидкий слой сверху удаляют фильтровальной бумагой и вместо него наносят исследуемый раствор. В отличие от анализа в щелочной системе исследуемый раствор перед нанесением разводят в 8 раз разбавленным раствором Бк. В остальном все элементы процедуры аналогичны щелочной системе анализа.

2. Одним из наиболее значительных преимуществ этого метода является его пригодность для исследования очень небольших количеств белка или пептидов. Это особенно ценно, например, для анализа разбавленных элюатов, получаемых при хроматографии и гель-фильтрации. Диск-электрофорез позволяет анализировать эти элюаты без предварительного концентрирования.

3. Окрашенные колонки геля можно продолжительное время хранить в пробирках с отмывающим раствором. Результаты фракционирования обычно регистрируют фотографически, причем удобнее всего фотографировать окрашенные колонки в таких пробирках.

4. Диск-электрофорез в акриламидном геле, содержащем мочевину. Раствор А: 8М раствор мочевины (24,Ог перекристаллизованной мочевины растворяют в 50 мл деионизованной воды и муравьиной кислотой доводят рН до 3,2). Раствор Б: 30%-ный цианогум. Раствор В: 0,12 мл N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамина (ТЕМЭД) в 25 мл раствора А. Раствор Г: насыщенный раствор персульфата калия.

Приготовление геля. В вакуумной колбе смешивают 7 мл раствора Б, 3,5 мл раствора В и 17 мл раствора А и с помощью вакуумного насоса удаляют из смеси воздух. Затем добавляют 0,7 мл раствора Г и, смешав, заполняют полученным раствором стеклянные трубки прибора для диск-электрофореза, как рекомендуется на стр. 90. Сверху на гелеобразующий раствор наслаивают 5—8 мм дистиллированной воды.

В буферные резервуары заливают раствор 5,5 М мочевины (330,0 г мочевины на 1000 мл воды), доведенный до рН 3,2 муравьиной кислотой.

Внесение исследуемого образца. Исследуемый раствор смешивают с равным объемом 40%-ной сахарозы и наслаивают на гель. Объем наносимого образца не должен превышать V30 общего объема геля.

Процедуры электрофореза и окрашивания подобны тем, которые уже описаны на стр. 90.

Цитированная литература

1. Aronsson Т., Gronwall A., Scand. J. Clin. Lab. Invest., 9, 128 (1957).

2. Benhamou E., Pugliese J., Chichn J. C, Amouch P., Presse med., 62, 65 (1954).

3. Cremer ?>., Tiselius, A., Biochem. Z., 320, 273 (1950).

4. Ditterbrandt M., Am. J. Clin. Path., 18, 439 (1948).

5. McDonald H. J., Bermes E. W.} Biochim. Biophys. Acta, 17, 290 (1955)

6. Durrum E. L., J. Colloid. Sci., 6, 224 (1951).

7. Flodin P., Porath J., Biochim. Biophys. Acta, 13, 696 (1954).

8. Folin C, Ciocalteu V., J. Biol. Chem., 73, 627 (1927).

9. Fuhr J., Hinz O. S., Klin. Wschr., 31, 153 (1953).

10. Fuhr J., Hinz O. 5., Klin. Wschr., 33, 87 (1955).

11. Grassmann W., Hannig K., Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem., 290, 1 (1952).

12. Jencks W. P., Durrum E. /., J. Clin. Invest., 34, 1437(1955).

13. Kabat E. A., Glusman M., Kuaub V., Am. J. Med., 4, 653 (1948).

14. Kawerau E., Analyst, 79, 681 (1954).

15. Kohn J., Protides Biol. Fluids, Elsevier Publ., Co., Amsterdam (1959).

16. Koiw ?., Gronwall A., Scand. J. Clin. Lab. Invest., 4, 244 (1952).

17. Korver G., Klin Wschr., 28, 693 (1950).

18. Kunkel H. G., Tiselius A., J. Gen. Physiol., 35, 89 (1951).

19. Lillie R. D., Burtner H. J., J. Histochem., 1, 8 (1953).

20. Ott H., Die med. Welt, 51, 2697 (1960).

21. Ott //., Electrophorese in Acrylamid Gel, in: Proteides Biol. Fluids, Elsevier Publ. Co., Amsterdam, 1962.

22. Poulik M. D., Edelman G. M., Protides Biol. Fluids, 9, 126 (1961).

23. Pucar Z., Z. Physiol. Chem., 269, 62 (1954).

24. Rottger H.y Naturwiss., 39, 451 (1952).

25. Scheurlen P. P., Goll R., Klin. Wschr., 39, 696 (1961).

26. Smithies O., Nature, 175, 307 (1955).

27. Sudhof H., Klin. Wschr., 36, 536 (195

страница 39
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
эмигрэйс атлас бланко плитка в ванну
домашний кинотеатр мебель
наращивание ногтей гелем курсы в одинцово
сколько стоят курсы парикмахера вмоскве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)