химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

рхнего резервуара крепятся 12 стеклянных трубок, заполненных гелем. Они размещаются на равном расстоянии от электрода по кругу с диаметром 100 мм. Таким образом прибор позволяет исследовать одновременно 12 образцов. Трубки крепятся ко дну буферного резервуара с помощью завинчивающихся колец (фиг. 14).

МЕТОДИКА

/. Приготэзление растворов, а) Основные растворы для приготовления геля. Раствор Ащ: 36,6 г триса (чистого) растворяют в дистиллированной воде, добавляют 48 мл 1 н. НС1 (х. ч.), 0,23 мл N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамина (ч.) и дистиллированной водой доводят объем до 100 мл.

Раствор Бщ: 0,735 г N, N'-метиленбисакриламида растворяют в дистиллированной воде, затем добавляют 28,0 г акриламида, доводят объем дистиллированной водой до 100 мл и фильтруют.

Раствор Вщ: 0,14 г персульфата аммония (х. ч.) растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 100 мл.

Растворы Ащ и Бщ можно хранить несколько недель в склянках из темного стекла в холодильнике. Срок использования раствора Вщ — не более недели.

б) Раствор мономеров для приготовления мелкопористого геля

(рН 8,9). Смешивают растворы Ащ, Бщ, Вщ и дистиллированную воду

в соотношении 1:2:4:1. Если готовят гель для заполнения всех

12 трубок, то каждая часть соответствует 3,5 мл.

в) Электродный буферный раствор (рН 8,3). В дистиллированной воде растворяют 1,2 г триса (х. ч.), 5,76 г глицина (х. ч.) и

доводят объем до 200 мл.

г) Раствор амидового черного. 10,0 г амидового черного 10 В

растворяют в 7%-ной уксусной кислоте в конечном объеме 1000 мл.

Перед использованием раствор красителя следует профильтровать

через бумагу. Для отмывки и хранения колонок полиакриламидного геля можно использовать 7%-ный раствор уксусной кислоты.

2. Приготовление геля. Стеклянные трубки закрепляют в подставке. В вакуумной колбе на 50 мл готовят раствор мономеров (б) и удаляют из него воздух, создавая разрежение в колбе с помощью вакуумного насоса. В каждую стеклянную трубку пипеткой вносят по 2 мл раствора мономеров и, чтобы не образовывался мениск, сверху наслаивают 5—8 мм разбавленного в 8 раз раствора Ащ. Полимеризация наступает примерно через 30 мин. Как только она произойдет, между гелем и расположенной выше жидкостью образуется четкая граница. После образования геля слой жидкости удаляют фильтровальной бумагой.

3. Внесение исследуемого образца. Исследуемые растворы, содержащие примерно 1—2 мг белка в 1 мл, разбавляют равным объемом 40%-ной сахарозы. На каждую колонку полиакриламидного геля наносят 50—100 мкг гомогенного или 200—500 мкг гетерогенного белка или смеси белков. После внесения образца трубки осторожно заполняют электродным буферным раствором. Заполненные трубки монтируют ко дну верхнего резервуара и в каждый резервуар заливают по 1 л соответствующего буферного раствора.

4. Электрофорез. В первые 30 мин электрофореза ток в цепи должен достичь 2 мА и позже не должен превышать 5 мА. Рекомендуется поместить работающий прибор в холодильник. Разделение белков сыворотки продолжается примерно 60—90 мин.

5. Извлечение геля из стеклянных трубок. По окончании электрофореза трубки вынимают из прибора и погружают в кювету, наполненную водой. Под водой между гелем и стеклом спиральным движением вводят узкую лопаточку или упругую проволочку, отслаивая гель от поверхности стекла. Вода проникает между гелем и стеклом, и колонка геля легко извлекается из трубки.

6. Окрашивание. Колонки геля на 1ч погружают в раствор амидового черного, затем ополаскивают водопроводной водой и переносят в отмывающий раствор. Смену отмывающего раствора производят до полной прозрачности участков геля, не содержащих белка.

Примечания. 1. Основные белки и пептиды анализируют в кислой среде (рН 4,3). Для их фракционирования требуются следующие растворы.

а) Основные растворы для приготовления геля. Раствор Ак:

смешивают 48 мл 1 н. КОН (х. ч.) и 17,2 мл уксусной кислоты

(х. ч.), прибавляют 4 мл N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамина

(ч.) и доводят объем дистиллированной водой до 100 мл.

Раствор Бк: смешивают 48 мл 1 н. КОН (х.ч.) и 2,87 мл уксусной кислоты (х. ч.), прибавляют 0,46 мл N, N, N'-тетраметилэтилендиамина (ч.) и доводят объем дистиллированной водой до 100 мл.

Раствор Вк: в дистиллированной воде растворяют сначала 0,4 г N, N'-метиленбисакрил амида, а затем 60,0 г акрил амида, доводят объем до 100 мл и фильтруют.

Раствор Гк: в дистиллированной воде растворяют сначала 2,5 г N, N'-метиленбисакриламида, а затем 10,0 г акриламида, доводят объем до 100 мл и фильтруют.

Раствор Дк: в 100 мл дистиллированной воды растворяют 4,0 мг рибофлавина и фильтруют перед использованием.

Раствор Ек: в 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,28 г персульфата аммония (х. ч.).

Все растворы, кроме Ек, можно хранить несколько недель в склянках из темного стекла в холодильнике. Срок хранения раствора Ек не должен превышать недели.

б) Раствор мономеров для получения мелкопористого геля

(рН4,3). Смешивают растворы Ак, Вк, Ек и дистиллированную воду

в соо

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аренда автобуса на свадьбу москва
кухонные столы купить дешево
Стулья и кресла Разноцветный купить
где разместить вещи на хранение в москве?

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.03.2017)