химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

отверстия в нижней части камеры плотно закрывают резиновыми пробками. Сосуд 2 до краев заливают гелеобразующим раствором и закрывают крышкой 4.

3. Подготовка прибора для электрофореза. Как только произойдет образование геля, резиновыепробки в нижней части камеры

3 вынимают, осторожно выдвигают прокладки 5 и б и, наконец, извлекают сосуд 2, содержащий гель. Его монтируют вертикально таким образом, чтобы наполняющий нижний резервуар прибора буферный раствор мог свободно контактировать с поверхностью геля. С помощью соответствующего штатива закрепляют верхний резервуар прибора и соединяют его с верхней частью сосуда 2. Крышку

4 осторожно приподнимают. Благодаря выступам на ее внутренней поверхности (см. фиг. 10) в верхнем слое геля образуются углубления правильной формы, которые могут служить лунками для внесения образца. Избегая образования пузырьков воздуха, эти углубления заполняют буферным раствором с помощью капиллярной пипетки. Электрический контакт между буферным раствором, содержащимся в верхнем резервуаре, и верхним концом столбика геля осуществляется за счет полоски фильтровальной бумаги соответствующей формы, смоченной буферным раствором. Исследуемую сыворотку (или любую другую смесь белков) вносят в заполненные буферным раствором углубления верхней части геля, причем 0,03 мл сыворотки подслаивают на дно углубления, и она оказывается между гелем и буферным раствором, покрывающим гель до начала электрофореза.

4. Электрофорез. При толщине блока полиакриламидного геля 6 мм электрофорез продолжается 36 ч при напряжении 100 В и силе тока 25—30 мА. За это время белки успевают мигрировать на расстояние до 23 см. После окончания электрофореза сосуд, содержащий гель, вынимают из прибора, осторожно снимают крышку и, стараясь не повредить гель, переносят его в окрашивающий раствор.

5. Окрашивание полиакриламидного геля. Окрашивающий раствор: 1,0 г амидового черного 10В растворяют в 200 мл смеси уксусная кислота—метанол—дистиллированная вода (1 : 5 : 5), оставляют на ночь и затем фильтруют. Окрашивающий раствор можно использовать несколько раз, но предварительно его каждый раз необходимо фильтровать. Дифференцирующие растворы: 1) раствор, содержащий смесь уксусная кислота—метанол—дистиллированная вода (1 : 5:5) и 2) 7%-ный раствор уксусной кислоты.

После 30 мин окрашивания гель несколько минут промывают водопроводной водой, помещают сначала на 24 ч в первый дифференцирующий раствор, а затем во второй до полного обесцвечивания тех частей, которые не содержат белка.

6. Количественная оценка. Количественный анализ пластинок геля проводят с помощью денситометра (см. стр. 63).

Примечания. 1. 7,5%-ный полиакриламидный гель имеет поры со

средним размером около 50 А. Белки, диаметр молекул которых не

превышает 40 А, должны мигрировать в нем без задержки.

2. Удаление красителя из геля можно производить электро-форетическим способом.

3. При денситометрии пластинок геля толщиной 6 мм могут возникнуть затруднения, для устранения которых приходится вносить изменения в устройство денситометра.

2. ДИСК-ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

Принцип метода. Миграция и разделение белков происходят в небольших цилиндрических колонках полиакриламида. [Термин диск-электрофорез происходит от дископодобной формы фрагментов колонки геля, в которых содержатся фракции, а также от английского слова «discontinuous», которым названа неоднородная («прерывистая») буферная система, обычно используемая в этом методе.]

Область применения: фракционирование и определение гомогенности белков (сывороточных белков, ферментов, белковых гормонов и т. д.), нуклеиновых кислот, пептидов и т. д.

ПРИБОРЫ

В продаже имеются приборы нескольких типов. Ниже мы описываем прибор для аналитического электрофореза в полиакриламидном геле, который производит фирма Reanal (Венгрия).

/. Стеклянные трубки для геля и подставка для них. Колонки геля готовят в стеклянных трубках, имеющих длину 100 мм и внутренний диаметр 6 мм. На время полимеризации геля их вставляют в специальную подставку, представляющую собой двухслойную плексигласовую пластинку, в верхнем слое которой высверлены отверстия для трубок (фиг. 12, А). Трубки устанавливают вертикально и закрепляют внизу завинчивающимися плексигласовыми кольцами и резиновыми прокладками (фиг. 12, Б).

2. Прибор для электрофореза. Прибор состоит из верхнего и нижнего резервуаров для буферного раствора (фиг. 13), изготовленных из плексигласа. Верхний резервуар крепится на нижнем плексигласовыми стойками с винтами. В центре каждого резервуара в цилиндрическом патроне из плексигласа помещается угольный электрод, который вместе с патроном можно извлечь из резервуара. В стенке патрона сделаны отверстия для постоянного конФиг. 13. Буферные резервуары прн- Фиг. 14. бора для аналитического диск-элект- трубки с рофореза.

Крепленые стеклянной гелем ко диу буферного резервуара.

такта электродов с буферным раствором независимо от его уровня, поскольку эти отверстия образуют лабиринтную систему. Снизу ко дну ве

страница 37
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
мытищи бухгалтерские курсы стоимость
лоди-2
курсы наращивания ногтей в москве цены
курсы кройки и шитья юго запад москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)