химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

накладывают на оба конца крахмального блока так, чтобы они обеспечили контакт в электрической цепи с буферными растворами в резервуарах аппарата. Ванну с крахмальным гелем закрывают крышкой, которую закрепляют винтами.

2. Электрофорез. Смоченные фитили обеспечивают контакт в электрической цепи крахмального блока с буферным раствором в резервуарах аппарата. Систему на 15 мин оставляют для уравновешивания и затем проводят электрофорез при напряжении 300 В и силе тока 30 мА в течение 24—30 ч, желательно с охлаждением.

3. Выделение, фракций. Закончив электрофорез, блок извлекают из ванны и, слегка подсушив, разрезают на фрагменты шириной 1 см. Каждый фрагмент переносят в центрифужную пробирку соответствующего размера и размешивают с 3 мл буферного раствора. Осадок крахмала отделяют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют содержание белка и на основании этих данных строят кривую фракционирования. В соответствии с этой кривой нужные фракции объединяют.

Примечания. 1. В зависимости от конкретных условий размеры крахмального блока могут варьировать. Однако следует помнить, что при толщине геля, значительно превышающей 0,5 см, начинает проявляться действие силы тяжести; при этом буферный раствор может скапливаться в нижних слоях крахмального блока, что ухудшает разделение.

2. Перед заполнением ванны крахмалом ее рекомендуется выстлать жиронепроницаемой бумагой, пленкой «парафильм» или нейлоном; этими же материалами следует покрыть блок, прежде чем закрывать крышку ванны.

3. Для непрерывного наблюдения за миграцией белков при фракционировании сыворотки к ней рекомендуется добавить бромфено-ловый синий.

4. Вместо крахмала весьма удобно использовать певикон, который следует обрабатывать так же, как и крахмал.

Д. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

1. ЗОНАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ [20,211

Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в геле, образованном при сополимеризации акриламида и N, N'-метиленбисакриламида.

Область применения: электрофоретическое фракционирование белков. Зональный электрофорез в полиакриламидном геле является наилучшим методом электрофоретического фракционирования белковых смесей. Он позволяет разделить белки сыворотки человека примерно на 20 отчетливо различаемых фракций.

ПРИБОРЫ

/. Приспособление для приготовления геля. Гель готовят в простом приборе, который можно сделать в любой подсобной мастерской. Модель, изображенная на фиг. 10, изготавливается фирмой Sar-torius Membranfilter Ltd. (ФРГ). Образование геля происходит в прямоугольной камере 3, в которую вставляется сосуд 2, с крышкой /. Два отверстия, сделанные в дне камеры, могут плотно закрываться резиновыми пробками. Прокладки 5 и 6 изготовлены из плексигласа, и их длина несколько превышает высоту сосуда. Закрытый крышкой сосуд вместе с прокладками вставляют в камеру. Затем сосуд до краев наполняют ге-леобразующей жидкостью и осторожно закрывают крышкой 4, избегая образования пузырьков воздуха. Прокладки, а также отверстия в нижней части камеры значительно облег- фиг- 10* Прибор для приго„ товления полиакриламидного

чают извлечение сосуда из камеры геля (описание смр в тексте)>

после окончания гелеобразования.

2. Резервуары для буферного раствора (фиг. 11). Резервуары для буферного раствора закрепляются на штативе, который не показан на фиг. 11. Сосуд 2, наполненный гелем, располагается вертикально, так что нижняя не закрытая крышкой / часть геля (см. фиг. 10) контактирует с буферным раствором, в то время как контакт верхнего конца пластинки геля с буферным раствором верхнего резервуара обеспечивается с помощью фитилей из фильтровальной бумаги.

МЕТОДИКА

/. Приготовление буферного раствора рН 8,6, р = 03. Основной раствор: 17,94 г диэтилбарбитурата натрия растворяют в 129 мл 0,1 н. НС1 и прибавляют 871 мл дистиллированной воды. Буферный раствор: основной раствор разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:2.

Гель, а) 2,5 г N, N'-метиленбисакриламида растворяют в 400 мл

буферного раствора при осторожном нагревании, в водяной бане, после чего объем раствора доводят тем же буферным раствором до 500 мл (конечная концентрация N,N'-метиленбисакриламида должна быть 0,5%); б) 17,5 г акриламида растворяют в 133,6 мл раствора (а), буферным раствором доводят объем до 350 мл и фильтруют. Полученный раствор остается жидким до тех пор, пока в него не добавят катализатор. Катализатор следует добавлять непосредственно перед заполнением сосуда, в котором происходит гелеобразование. В качестве катализатора гелеобразования можно применять раствор персульфата аммония (приготовленный раствор годен к применению не более недели) или раствор диметиламино-пропионитрила.

После добавления катализатора гелеобразующий раствор следует тщательно перемешать и заполнить им сосуд.

Образование геля происходит примерно через 20—30 мин.

2. Заполнение камеры и образование геля. Закрытый крышкой 1 сосуд 2 вместе с прокладками 5 и 6 вдвигают в камеру <3;

страница 36
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить очаг с паром
durastyle
Бокалы для красного вина Riedel купить
Форма Саварин, 22 см

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.02.2017)