химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

е. Затем гель осторожно уплотняют вокруг полоски, чтобы обеспечить более тесный контакт ее с крахмалом.

5. Локализация фракций с помощью окрашивания. Можно определить положение белковых фракций в крахмале, окрашивая непосредственно сам гель, например амидовым черным 10 В.

4—439

Приготовление окрашивающего раствора: 2,0 г амидового черного 10 В растворяют в 500 мл метанола и оставляют на 24 ч, затем добавляют 100 мл уксусной кислоты и 400 мл дистиллированной воды. Через 24 ч раствор красителя готов для использования.

Дифференцирующий раствор: смешивают 500 мл метанола, 100 мл уксусной кислоты и 400 мл дистиллированной воды. Окрашивают 20 мин, дифференцируют дважды по 20 мин.

6. Толщина слоя крахмального геля не должна превышать 5— 10 мм. В более толстом слое геля миграция белков происходит неравномерно.

7. Фракции белка, разделившиеся в крахмальном геле, можно идентифицировать в реакции преципитации со специфической антисывороткой. Для этого Шёрлен и Голь [25] предложили комбинировать электрофорез в крахмальном геле с иммунодиффузией в агаровом геле.

Методика. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины. Одну половину окрашивают обычным образом, другую переносят на стеклянную пластинку и располагают колонки крахмала так, как показано на фиг. 9. Затем вокруг них наливают горячий раствор агара (приготовление см. на стр. 127), при застывании которого образуется слой толщиной 3 мм. Агар не должен закрывать крахмальный гель; на расстоянии 12—16 мм от колонок крахмала в нем делают прорези шириной 1 мм (фиг. 9). Через 6—12 ч после нанесения на пластинку агара в эти прорези заливают специфическую антисыворотку к фракционируемым белкам. В результате диффузии белков и антител в агаре через 2—4 дня появляются линии преципитации (см. иммуноэлектрофорез, стр. 137).

8. Электрофорез в крахмальном геле, содержащем мочевину.

Эффективность разработанного Пуликом и Эдельманом [22] метода

2 J 2 /

2 3 2 /

0,05т

12-16 мм

^0,6~0,8ш\ 12-16 мм

12-16 мм

0,6-0,8мд 12-16 мм

6~8мм

?V

15-20 см

Фиг. 9. Комбинация электрофореза в крахмальном геле с иммунодиффузией

в агаре [25].

1 — крахмальный гель; 2 — агаровый гель; 3— иммунная сыворотка.

анализа Н- и L-цепей иммуноглобулинов с помощью электрофореза в крахмальном геле, содержащем мочевину, была подтверждена в нашей лаборатории.

Буферный раствор для приготовления геля: 240,0 г мочевины и 1,35 г муравьиной кислоты растворяют в дистиллированной воде в конечном объеме 500 мл.

Буферный раствор для заполнения камер прибора: 9,6 г NaOH и 32,7 г муравьиной кислоты растворяют в дистиллированной воде в конечном объеме 3 л.

Крахмал суспендируют в 270 мл буферного раствора, предназначенного для геля, в котором растворено 40,0 г мочевины. Все остальные процедуры проводят так же, как и при обычном горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле (стр. 80).

9. Препаративный электрофорез в крахмальном блоке. Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в крахмальном блоке, в результате которой белки разделяются, а после разделения их можно элюировать из крахмала.

Область применения: препаративное выделение индивидуальных белков из белковых смесей, очистка белковых фракций.

Приборы. /. Источник тока. Для этого метода необходим источник постоянного тока со стабилизированным напряжением от 0 до 500 В.

2. Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке. В продаже имеется ряд специальных аппаратов для электрофореза в крахмальном блоке. Вместе с тем некоторые изменения конструкции позволяют приспособить для этой цели почти любой лабораторный прибор для электрофореза. Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке имеет: а) резервуары для буферного раствора и электродов (см. стр. 46), б) ванну для крахмального блока, которую можно сделать самостоятельно следующим образом. Вырезают две одинаковые пластинки из плексигласа (например, размером 50 х 13 х Х0,5 см). По кромке одной из них наклеивают плексигласовый бортик высотой 0,5 см. Вторая пластинка служит крышкой для этой ванны. По краям пластинок на расстоянии примерно 10 см одно от другого высверливают отверстия для того, чтобы крышку и ванну можно было скрепить винтами.

Методика. /. Приготовление крахмального геля. В колбе на 1 л смешивают примерно 300 мл вероналового буферного раствора рН 8,6 (см. стр. 47) с равным объемом очищенного (не гидролизован-ного!) картофельного крахмала. Размешав, густую пасту выливают на плексигласовую пластинку с бортиком и оставляют на 10 мин. Фильтровальной бумагой удаляют избыток буферного раствора и затем поверхность крахмальной пасты разглаживают лопаточкой или другим подходящим инструментом. На одном конце готового блока вырезают желобок размером 1 х 9 см и в него вносят исследуемый раствор белков (например, 3 мл сыворотки крови), пред-4* варительно смешанный с сухим крахмалом до консистенции густой пасты. Из фильтрованной бумаги соответствующего размера делают фитили и, смочив их буферным раствором,

страница 35
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
обучение ремонту холодильников в татарстане
прерывание беременности стоимость в москве
уфо братья запашные билеты
компьютерные столы в столплите

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(14.12.2017)