химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

которую, надавливая, погружают в крахмальный гель; попадающий при этом в ее внутреннюю

полость кусочек геля удаляют. 0,05 мл сыворотки тщательно размешивают с сухим крахмалом, который берут в таком количестве,

чтобы получилась однородная паста такой же консистенции, как

и сам гель. При помощи «плунжерной» части 2 приспособления эту

пасту вносят в желобок. Удалять рамку следует очень осторожно,

стараясь не повредить целостность геля. После этого окошко в

парафиновой пленке закрывают новым слоем расплавленного парафина.

5. Электрофорез. Электрофорез в крахмальном геле продолжается 14—18 ч при градиенте напряжения 6 В/см.

6. Локализация белковых фракций. Закончив электрофорез, ъанну с крахмальным гелем извлекают из прибора и располагают горизонтально на столе. Пленку парафина, закрывающую гель, удаляют, и всю поверхность крахмала покрывают листом фильтровальной бумаги. Лист плотно прижимают к поверхности геля в течение 5 мин, затем снимают его, высушивают в сушильном шкафу при 100° С и окрашивают белковыми красителями (см. стр. 54). Этим способом удается установить локализацию фракций, не прибегая к окрашиванию самого крахмального геля (метод отпечатков).

7. Элюирование белковых фракций. Используя окрашенный бумажный отпечаток, отмечают границы каждой фракции на крахмальном блоке. Острым лезвием по этим границам делят гель на фрагменты. Каждый фрагмент крахмального геля отдельно суспендируют в 10 мл холодной дистиллированной воды, частицы крахмала осаждают центрифугированием при 2000 об/мин и в надоса-дочной жидкости определяют содержание белка.

2. ГОРИЗОНТАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ ГЕЛЕ

В нашей лаборатории горизонтальный электрофорез в крахмальном геле проводят по методу Смитиса [26] в камере для зонального полумикроэлектрофореза следующим образом.

Буферный раствор: боратный буфер рН 8,6. Приготовление буферного раствора, заполняющего камеры прибора: 45,65 г Н3В03 и 7,2 г NaOH растворяют в дистиллированной воде в конечном объеме 5 л. Приготовление буферного раствора для крахмального геля. Основной раствор: 30,92 г Н3В03 и 8,0 г NaOH растворяют в дистиллированной воде и доводят конечный объем до 1 л. Перед приготовлением крахмального геля 60 мл основного раствора разводят дистиллированной водой до 1000 мл.

МЕТОДИКА

Приготовление крахмального геля. Берут такую навеску гидро-лизованного картофельного крахмала, чтобы конечная его концентрация составляла примерно 13—14%. Взвешенный крахмал суспендируют с размешиванием в 1/4 конечного объема буферного раствора. Остальной объем буферного раствора нагревают до кипения и затем охлаждают до тех пор (примерно до 96° С), пока не исчезнут пузырьки пара и воздуха. В горячий буферный раствор вливают суспензию крахмала и осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков. Легче всего избавиться от пузырьков тзоздуха, поместив крахмальную суспензию в вакуум. Появление стекловидной прозрачности геля свидетельствует о том, что размешиванием достигнута определенная степень гомогенности.

Полученный гель выливают в горизонтальную ванну, прикрытую стеклянной пластинкой. Эта ванна входит в комплект прибора для электрофореза. Гель должен полностью закрывать обеспечивающие электрический контакт фитили. Подготовку ванны с крахмальным гелем необходимо закончить в течение 3—5 мин. Примерно через час после этого в гель можно вносить исследуемый образец, как это описано в п. 4 разд. 1.

Электрофорез продолжается б ч при 140 В и 70 мА. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины, одну из которых окрашивают амидовым черным 10 В (см. стр. 87).

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Гидролиз картофельного крахмала. 500,0 г имеющегося в

продаже картофельного крахмала гидролизуют в смеси НС1 и ацетона (10 мл химически чистой НС1 и 990 мл ацетона) при 37° С в

течение 6—18 ч. Для прекращения гидролиза добавляют, тщательно перемешивая, 250 мл 1 М раствора уксуснокислого натрия

(134,0 г на 1000 мл).

Гидролизованный крахмал отмывают обычно на воронке Бюх-нера 5 л дистиллированной воды, пропускают через него под вакуумом 300—350 мл ацетона для подсушивания и окончательно высушивают под инфракрасной лампой 3—4 ч, не допуская перегрева выше 60° С. После высушивания крахмал на 24 ч оставляют на воздухе.

2. Если для приготовления геля использовать частицы крахмала определенного размера, то электрофорез в таком геле может дать лучшее разделение белков, чем на бумаге.

3. Описанные выше методы электрофореза в крахмальном геле позволяют одновременно анализировать несколько белковых растворов (например, сразу несколько сывороток), если использовать более широкую ванну для геля. Например, в ванне шириной 124 мм можно одновременно параллельно фракционировать 8—10 сывороток.

4. Кроме описанного, существует также другой простой способ внесения исследуемого образца в гель. Необходимое количество белкового раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги и погружают эту полоску в узкую щель, вырезанную скальпелем или шпателем в крахмальном блок

страница 34
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ремонт холодильника Bosch KGV39XL20
установка дом кинотеатров
poetsofthefall
максимилиан билеты спб

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.07.2017)