химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

трическим методом. Отделенная от стекла и высушенная агаровая пластинка достаточно прозрачна, поэтому ее без дополнительной обработки помещают между стеклянными пластинками денситометра и проводят измерение оптической плотности, как описано на стр. 63.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Миграция белков в слое агарового геля подобна их движению при свободном электрофорезе. Однако в агаровом геле значительно сильнее, чем при электрофорезе на бумаге, выражен электроосмос, который усиливает поток буферного раствора в сторону катода. Чтобы устранить возможные артефакты, следует размещать лунки для внесения исследуемого образца точно в центре агаровой пластинки.

2. В электрофоретических камерах типа Грассмана—Ханнига можно использовать стеклянные пластинки размером 16 х 4 см. Приготовление агарового слоя на этих пластинках производится так же, как описано выше.

3. Вместо того чтобы вносить белковый раствор (например, сыворотку крови) в заранее вырезанную лунку, можно нанести его на отрезок фильтровальной бумаги 10 х 3 мм и приложить бумагу к поверхности агара в соответствующем месте, после чего белковый раствор диффундирует в гель. Преимущество этого способа заключается в том, что отпадает необходимость вырезать нарушающие целостность электрофореграммы лунки. Но, с другой стороны, при этом способе внесения образца нельзя точно определить количество белка, продиффундировавшего в агар.

4. Во время электрофореза можно непосредственно наблюдать за миграцией белков сыворотки, если окрасить их конго красным или бромфеноловым синим. Эти красители движутся вместе с фракцией альбумина.

5. Кроме описанного фиксатора, при окрашивании липопротеи-дов можно применять также фиксирующий раствор следующего состава [29]: смесь 500 мл этанола, 20 мл 10%-ного раствора СаС12 и 20 мл уксусной кислоты, объем которой доводят до 1000 мл дистиллированной водой. Агаровые пластинки помещают в этот фиксатор на 6 ч.

Г. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ ГЕЛЕ

1. ВЕРТИКАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ

ГЕЛЕ

Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в крахмальном геле.

Область применения. Изучение белков сыворотки, липо- и глико-протеидов, белковых гормонов, гемоглобинов, тканевых белков-и т. д.

ПРИБОРЫ

1. Прибор для электрофореза, предложенный Смитисом в 1955 г. [26]. На фиг. 7 представлена схема прибора для вертикального

электрофореза в крахмальном геле. Вертикально расположенная ванна, в которой находится крахмальный гель, имеет размер 6,5 х 20 х 250 мм. Буферный раствор заливают в резервуары 1 и 2, разделенные перегородкой из плексигласа на два отсека. В наружном отсеке каждого резервуара находятся угольные или платиновые электроды. Оба отсека в каждом резервуаре, а также буферный раствор и крахмальный гель соединяются между собой влажными полосками фильтровальной бумаги.

2. Источник тока: см. стр. 46.

МЕТОДИКА

1. Приготовление буферного раствора. Для крахмального геля готовят боратный буферный раствор 0,03 М Н3ВОг в 0,012 н. NaOH, а для заполнения камер прибора используют буферный раствор, содержащий 0,3 М Н 3В03 и 0,06 н. NaOH.

2. Приготовление крахмального геля. Навеску картофельного крахмала суспендируют в 3 объемах воды, тщательно перемешивают и оставляют на 30 мин для отстаивания. Надосадочную жидкость,

в которую переходят из крахмала растворимые примеси, отбрасывают. Отмывание крахмала отстаиванием повторяют дважды, затем осадок переносят в воронку Бюхнера и 3—4 раза промывают буферным раствором. После этого делают пастоподобную смесь крахмала с буферным раствором и примерно 100 мл этой пасты переносят в коническую колбу емкостью 0,5 л. Постоянно размешивая, крахмальную пасту нагревают до получения абсолютно гомогенной массы, причем следует избегать кипения геля. Чтобы удалить пузырьки воздуха, в колбе, содержащей нагретый гомогенный крахмальный гель, с помощью вакуумного насоса создают разрежение, и гель на 1—2 мин вскипает. После этого им заполняют ванну прибора для электрофореза; избыток буферного раствора удаляют с помощью толстой фильтровальной бумаги, а для того чтобы предотвратить испарение, поверхность геля заливают тонким слоем расплавленного парафина.

3. Соединение внутренней электрической цепи прибора. Крахмальный

гель в вертикально расположенной

ванне и буферный раствор, заполняющий резервуары 1 и 2, а также буферный и электродный отсеки в каждом резервуаре соединяются между собой бумажными мостиками. Каждый мостик состоит из 10 полосок фильтровальной бумаги, смоченной буферным раствором.

4. Внесение исследуемого образца. На расстоянии 7 см от катодного конца крахмального блока отмечают место внесения образца

и в парафиновой пленке прорезают окошко размером 10 х 3 мм.

Затем удаляют лежащий под парафином слой крахмального геля

так, чтобы получился желобок, в который и вносится исследуемый

материал. Очень удобно можно сделать этот желобок с помощью

приспособления, изображенного на фиг. 8. Оно представляет собой

стальную рамку с острыми краями ),

страница 33
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
цены на чугунные батареи отопления
толстовки (худи) в ярославле
получения сертификата мфсо
кровь в моче при цистите лечение

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)