химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ными достоинствами этого метода являются быстрота фракционирования и весьма малое количество необходимого для исследования материала.

2. В продаже имеются лт1сты ацетат-целлюлозной мембраны размером 54 х 57 см. Их можно использовать для электрофореза в крупногабаритных приборах.

В макроварианте вырезают полоски мембраны шириной 4 см и увеличивают объем наносимой сыворотки до 0,05—0,06 мл. В этом случае электрофорез продолжается 4—5 ч при напряжении 200 В или 1,5—2 ч при напряжении 400 В. Ионную силу буферного раствора Михаэлиса при этом уменьшают, разбавляя его дистиллированной водой в соотношении 3:2. В остальном макрометод ничем не отличается от микрометода.

3. Электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране можно проводить практически в любой камере для горизонтального электрофореза, в которой размещаются полоски длиной свыше 8—10 см.

Контакт с буферным раствором может осуществляться непосредственно концами мембраны или полосками фильтровальной бумаги»

выполняющими роль фитилей. Универсальную конструкцию имеет прибор для электрофореза фирмы Schandon (Англия) [15].

4. Широко распространены ацетат-целлюлозные мембраны следующих фирм: Oxoid, Охо Ltd. (Англия), Millipore Filter Corporation (США), Sartorius Membranfilter Gesellschaft (ФРГ).

ОКРАШИВАНИЕ АЦЕТАТ-ЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММ.

ОКРАШИВАНИЕ ПУНЦОВЫМ S

Окрашивающий раствор: 0,2%-ный раствор пунцового S в-3%-ной трихлоруксусной кислоте.

Отмывающий раствор: 5%-ная уксусная кислота.

Методика. Мембраны на 5—10 мин погружают в окрашивающий раствор, затем ополаскивают в нескольких сменах отмывающего-раствора, пока фон не станет совершенно белым. После этого полоски мембраны высушивают между слоями фильтровальной бумаги.

ОКРАШИВАНИЕ НИГРОЗИНОМ

Окрашивающий раствор: 0,002%-ный раствор нигрозина в 2%-ной уксусной кислоте.

Отмывающая среда: водопроводная вода.

Методика. Полоски мембраны, фиксированные нагреванием при 80—100°С или в 5%-ной трихлоруксусной кислоте, погружают в окрашивающий раствор на 1—2 ч. Затем их тщательно отмывают проточной водопроводной водой и высушивают при комнатной температуре.

Примечание. Окрашивание нигрозином весьма удобно для? определения очень малых количеств белка.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ЦЕЛЛОГЕЛЕ

Быстрое и четкое фракционирование можно получить на желати-низированной ацетат-целлюлозной мембране, имеющей фирменное название «целлогель» (Chemetron, Италия). Полоски целлогел» поставляются в пластмассовой упаковке в растворе метанола. После извлечения из упаковки их необходимо хранить вплоть до использования в 40—50%-ном растворе метанола. Для электрофореза в целлогеле применяют следующие буферные растворы. А. Буферный раствор с рН 9,0 и [* = 0,05 : 5,15 г диэтилбарбитурата натрия и 2,6 г натриевой соли ЭДТА растворяют в 1 л дистиллированной воды; Б. Буферный раствор с рН 8,6 и [i — 0,05 : 10,3 г диэтилбарбитурата натрия и 1,34 г диэтилбарбитуровой кислоты растворяют в 1 л дистиллированной воды.

Методика. Полоски целлогеля на 10 мин погружают в буферный раствор и затем избыток раствора удаляют фильтровальной бумагой. Полоски закрепляют в приборе и на опалесцирующую сторону целлогеля наносят 1,5—2,0 мкл сыворотки (другая сторона мембраны целлогеля не адсорбирует белки). При градиенте напряжения 12—15 В/см электрофорез продолжается 1—1,5 ч, после чего полоски извлекают из камеры и окрашивают амидовым черным.

Для приготовления окрашивающего раствора 0,5 г амидового черного растворяют в смеси 50 мл метанола, 40 мл дистиллированной воды и 10 мл уксусной кислоты. Дифференцирование проводят в растворе, состоящем из 500 мл метанола, 450 мл дистиллированной воды и 50 мл уксусной кислоты. Для количественного определения белковых фракций полоску целлогеля разрезают, элюируют каждую фракцию 80%-ным раствором уксусной кислоты или ацетоном и измеряют экстинкцию элюатов при 620 нм. Прозрачные полоски можно денситометрировать без элюирования. Для того чтобы сделать полоски целлогеля прозрачными, их погружают в раствор следующего состава: 50 мл дистиллированной воды, 37 мл метанола, 5 мл уксусной кислоты, 8 мл диацетонового спирта и 1—2 капли глицерина (вместо диацетонового спирта можно прибавить 5 мл молочной кислоты или 6 мл диацетина).

В. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В АГАРОВОМ ГЕЛЕ

Принцип метода: см. электрофорез на бумаге. В качестве поддерживающей среды используется агаровый гель. Область применения: см. электрофорез на бумаге.

ПРИБОРЫ

1. Источник тока: см. стр. 46.

2. Прибор для электрофореза: см. стр. 46.

МЕТОДИКА

1. Приготовление буферного раствора: см. стр. 47.

2. Очистка агара: см. стр. 127.

3. Приготовление агарового слоя. Стеклянные пластинки тщательно отмывают, высушивают и размещают на строго горизонтальной поверхности (см. стр. 138).

К двум краям стеклянной пластинки прикладывают две смоченные буферным раствором полоски фильтровальной бумаги шириной 40 мм так, чтобы край бумаги шириной 10 мм соприкасался со стеклом, а отрезок бумажной полоски шириной 30 мм выходил за пределы пластинки.

После этого

страница 31
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
навесные.буквы для школьной доски
банкетки для раздевалок
мебельные ручки скобы для кухни в розницу в москве
сетка для кирпичной кладки гост

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(16.01.2017)