химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

отовление. В колбе на 2 л в 700 мл дистиллированной воды растворяют 100,0 гЫа2\УО4*Н2Ои25,0г Na2Mo04-H20, затем добавляют 50 мл 85%-ного раствора Н3Р04 и 100мл концентрированнойНС1. Смесь в течение 10 ч кипятят с обратным холодильником, затем добавляют 150,0 г Li2S04, 50 мл дистиллированной воды и несколько капель брома; еще раз кипятят 15 мин для удаления избытка брома без обратного холодильника. После охлаждения объем реактива доводят до 1000 мл дистиллированной водой и фильтруют в бутыль из темного стекла, так как реактив следует хранить в темноте и оберегать от бактериального прорастания и попадания восстанавливающих веществ.

2. 20%-ный раствор Na2C03.

Методика. 9 мл исследуемого раствора вносят пипеткой в центрифужную пробирку или коническую колбу на 50 мл и медленно при постоянном помешивании добавляют к нему 5 мл 20%-ного раствора Na2C03. После этого, осторожно перемешивая, по каплям вливают 1 мл реактива Фолина—Чиокальтеу. Пробу на 5 мин погружают в водяную баню при 37° С, затем на 30 мин оставляют при комнатной температуре и определяют оптическую плотность при 750 нм.

Контрольная проба: к 9 мл дистиллированной воды добавляют 5 мл 20%-ного раствора Na2C03 и 1 мл реактива Фолина.

МИКРОМЕТОД

Реактивы. 1. Раствор"*А: 2%-ный раствор Na2C03 в0,1 н. NaOH.

2. Раствор В: 0,5%-ный раствор CUS04*5H20B 1%-ном растворе виннокислого натрия.

3. Раствор С: к 60 мл раствора А добавляют 1 мл раствора В; готовят непосредственно перед использованием.

4. Раствор D: реактив Фолина—Чиокальтеу (см. выше). Непосредственно перед применением реактив Фолина—Чиокальтеу титруют раствором NaOH известной нормальности в присутствии фенолфталеина и по данным титрования разбавляют до концентрации 1 н. (обычно примерно вдвое).

Методика. 0,2 мл исследуемого раствора, который может содержать от 5 до 100 мкг белка, смешивают в пробирке с 1 мл раствора С, оставляют на 10 мин и очень быстро в полученную смесь вносят 0,1 мл раствора D, 1—2 с встряхивают, оставляют на 30 мин и спектрофотометрируют при 750 нм. Каждое определение необходимо проводить с параллельными пробами.

Примечания. 1. Интенсивность цветной реакции с разными белками может быть различной, поэтому при постановке как макро-, так и микрометода для каждого исследуемого белка рекомендуется построить калибровочную кривую.

2. Цветная реакция зависит не только от содержания тирозина и триптофана в данном белке, но и от присутствия SH- и других восстанавливающих групп, а также от времени, в течение которого белок содержался в щелочной среде до прибавления реактива Фолина—Чиокальтеу.

3. Определение белка по Фолину—Чиокальтеу проводится довольно быстро и не требует предварительного разрушения исследуемого материала, поэтому оно, несомненно, удобнее определения белка по Кьельдалю. Однако если требуется выразить результаты в единицах белкового азота, то следует построить калибровочную кривую на основе количественного определения белкового азота по Кьельдалю.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА С ПОМОЩЬЮ БИУРЕТОВОЙ

РЕАКЦИИ [4]

Принцип метода. В щелочных растворах белков 4 атома азота, участвующие в пептидных связях, могут вступить в комплекс с одним атомом меди; эта реакция дает сине-фиолетовое окрашивание.

Чувствительность метода. С помощью биуретовой реакции можно количественно определить от 20 до 400 мкг белкового азота.

Реактивы, Биуретовый реактив в 1 л раствора содержит виннокислый калий-натрий 9,0 г; CuS04 ? 5Н20 3,0 г; KI 5,0 г; 0,2 н. NaOH (свободный от карбонатов).

Виннокислый калий-натрий растворяют в 400 мл 0,2 н. NaOH и прибавляют сульфат меди. Когда компоненты растворятся, добавляют йодистый калий и 0,2 н. NaOH, а затем доводят объем раствора до 1000 мл.

Методика. 1 мл исследуемого раствора белка смешивают с 1,5 мл биуретового реактива, оставляют на 30 мин при 37°С и определяют оптическую плотность при 555 нм.

Контрольная проба. 1 мл дистиллированной воды смешивают с 1,5 мл биуретового реактива. Каждое определение проводится с параллельными пробами.

Примечание. При использовании биуретового реактива в количественной реакции преципитации (см. стр. 125) удобно ставить реакцию в центрифужных пробирках на 8 мл, имеющих отметку 2,5 мл. После отмывки преципитат растворяют в 1,5 мл биуретового реактива и доводят объем раствора до метки (2,5 мл) дистиллированной водой. После инкубации определяют оптическую плотность.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ НИНГИДРИНОВОЙ РЕАКЦИИ [13]

Принцип метода. Нингидрин дает цветную реакцию с концевыми a-NH2-rpynnaMH белков, а также с e-NH2-rpynnaMH остатков лизина.

Чувствительность метода. Метод применим в том случае, когда исследуемый раствор содержит 1—20 мкг белкового азота.

Реактивы. /. Приготовление 0,2 М цитратного буферного раствора рН 5,0: 2,101 г одноводного кристаллогидрата лимонной кислоты С6Н807 • Н20 растворяют в 20 мл 1 н. NaOH и добавляют 50 мл дистиллированной воды. После двукратного разведения дистиллированной водой рН буферного раствора должен быть 5,0±0,1. Раствор можно хранить в холодильнике, добави

страница 29
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить букет из радужных роз
Фирма Ренессанс: лестницы винтовые-цены - оперативно, надежно и доступно!
кресло руководителя ch 838
Самое выгодное предложение в KNSneva.ru: MSI GS72 6QE-437 - офис продаж со стоянкой: Санкт Петербург, ул. Рузовская, д.11, тел. (812) 490-61-55.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)