химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

асходятся с данными свободного электрофореза или с данными, полученными методом элюирования. Эти расхождения заставляют некоторых исследователей вводить специальные поправки. Наша оценка этих поправок приведена на стр. 61.

4. Увеличение прозрачности электрофореграмм можно получить с помощью приспособления «Элфор-Транспавак» фирмы Веп-der-Hobein, ФРГ. Приспособление представляет собой стеклянный цилиндрический сосуд, сужением разделенный на две части. В верхнюю часть помещают электрофореграмму, в нижней находится пропитывающая жидкость. Сосуд герметически закрывают притертой крышкой и верхнюю его часть с помощью крана соединяют с вакуумным насосом. Достигнув необходимого разрежения, кран, соединяющий сосуд с вакуумным насосом, закрывают. Сосуд переворачивают, и через несколько минут окрашенная электрофоре-грамма пропитывается жидкостью. В этом случае не наблюдается образования пузырьков воздуха, которые мешают денситометрии.

3—439

4. НЕКОТОРЫЕ ИСТОЧНИКИ ОШИБОК ПРИ ПРОВЕДЕНИИ НИЗКОВОЛЬТНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ

1. Плохое разделение, несмотря на длительный электрофорез. Причину этого явления прежде всего следует искать в недостатках буферного раствора; может быть, слишком высока его концентрация.

2. Границы отдельных фракций выявляются недостаточно четко. Причиной этого может быть низкая ионная сила буферного раствора при достаточно высоком напряжении (см. стр. 50) или тепловая денатурация некоторых белков в результате локального выделения тепла при высоком напряжении.

3. Некоторые белковые фракции остаются в месте нанесения образца. Причиной этого может быть повреждение бумаги пипеткой в месте нанесения или необратимое связывание части глобулинов с бумагой. Последнее возможно в том случае, если сыворотку наносят на сухую или недостаточно влажную полоску бумаги.

4. Фракции продолжают диффундировать после выключения тока. Чтобы избежать этого, следует сразу же после выключения тока извлекать электрофореграммы из электрофоретической камеры.

5. Повторное разделение одного и того же материала дает разные результаты. Причина плохой воспроизводимости может заключаться в изменении условий опыта. Чтобы сделать условия опыта стандартными: а) необходимо помнить, что фильтровальная бумага должна быть одного и того же типа; б) необходимо стандартизовать факторы, влияющие на электрофорез (направление потоков буферного раствора, температура и т. п.) (см. стр. 52); в) краситель должен быть одним и тем же; г) не следует менять способа количественной оценки электрофореграмм. При использовании метода элюирования мы советуем окрашивать белки кислым фуксином. Несвязавшаяся с белком часть этого красителя легко удаляется из бумаги, а связавшийся краситель затем легко элюируется. С другой стороны, при фотоэлектрометрии электрофореграмм очень удобно применять окрашивание амидовым черным 10В, так как он прочнее других красителей связывается с белками и примерно в 10 раз сильнее поглощает свет. Несмотря на то что при отмывании электрофореграмм амидовый черный невозможно полностью удалить из бумаги, фотоэлектрические измерения после окрашивания этим красителем достаточно точны.

5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ

Принцип метода. Экстинкция белков, содержащих фенилала-нин, тирозин и триптофан, при 280 нм прямо пропорциональна их концентрации в растворе. Следует помнить, что коэффициенты экстинкции у разных белков различны.

Методика. Бесцветный, совершенно прозрачный раствор белка помещают в соответствующую кювету спектрофотометра и определяют величину экстинкции при длине волны 280 нм. Концентрацию белка рассчитывают, исходя из известного коэффициента экстинкции.

Примечания. 1. Достоинствами спектрсфотометрического определения белка являются простота, скорость и легкость выполнения. При использовании соответствующей аппаратуры (например, прибора «Увикорд» фирмы LKB, Швеция) этот метод позволяет проводить непрерывное определение концентрации белка в растворе.

2. Ограничение этого метода обусловлено тем, что его нельзя с равной эффективностью применять для определения разных белков, так как содержание ароматических аминокислот в них широко варьирует. Кроме того, ряд веществ небелкового происхождения может мешать определению белка (например, нуклеиновые кислоты, окрашенные простетические группы и т. д.).

3. Коэффициент экстинкции разных белков при длине волны 280 нм варьирует от 0,5 до 1,0 см3мг-1.

4. Спектрофотометрическим методом можно определить белок в концентрации не ниже 10—20 мкг/мл.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА С ПОМОЩЬЮ ФЕНОЛЬНОГО РЕАКТИВА ФОЛИНА—ЧИОКАЛЬТЕУ [8]

Принцип метода. Фенольный реактив Фолина—Чиокальтеу дает синее окрашивание с щелочными растворами белков. Интенсивность окрашивания в основном зависит от содержания в исследуемом белке тирозина и триптофана.

Чувствительность метода. С помощью макрометода можно определить 100—500, а микрометода — 5—35 мкг белкового азота.

МАКРОМЕТОД

Реактивы. 1. Фенольный реактив Фолина—Чиокальтеу, приг

страница 28
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить декоративную зелень для украшения арки
Компания Ренессанс стеклянная лестница - продажа, доставка, монтаж.
кресло клио цена
Удобно приобрести в КНС Нева HP Color LaserJet Professional CP5225DN CE712A - оформление в онлайн-кредит в Санкт-Петербурге.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)