химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ном, соединенный с вакуумным насосом.

2. Денситометр. Существует несколько моделей таких приборов, действующих по изложенному ниже принципу (фиг. 4). Бумажную электрофореграмму, прозрачность которой увеличена специальной пропиткой, зажимают между двумя стеклянными пластинкама 1 и помещают перед щелью 2, за которой расположен источник света 3. Позади зажатой между стеклянными пластинками электрофореграммы располагается фотоэлемент 4. По силе тока, возникающего в цепи фотоэлемента, можно определить величину экстинкции Е для каждого участка электрофореграммы:

Световой поток через неокрашенную часть

Е = •

Световой поток через окрашенную часть

1) Приборы без автоматических приспособлений. Приборы для денситометрии, в которых передвижение бумажной электрофореграммы и регистрация экстинкции производятся вручную.

2) Полуавтоматические приборы. Денситометры, в которых передвижение электрофореграммы и регистрация экстинкции производятся автоматически. Экспериментатор должен только провести количественный анализ кривой.

3) Полностью автоматические приборы. В этих приборах передвижение электрофореграммы, регистрация экстинкции и обсчет полученной кривой производятся автоматически.

МЕТОДИКА

1. Увеличение прозрачности бумажной электрофореграммы. Окрашенные и высушенные электрофореграммы погружают в сосуд для окрашивания, заполненный глицерином. Необходимо следить,.

чтобы глицерин полностью покрывал полоски бумаги. Сосуд с погруженными в глицерин электрофореграммами помещают в вакуумный эксикатор, закрывают крышку и на 30 мин создают вакуум, который способствует выходу пузырьков воздуха из бумаги и лучшему пропитыванию последней глицерином. Если через 30 мин окажется, что глицерин пропитал электрофореграммы недостаточно равномерно, всю процедуру следует повторить.

Кривую экстиикции. полученную с помощью фотоэлектрического детектора (сплошная линия), расчленяют на гауссовы кривые (пунктирные линии), соответствующие каждой фракции. Подробное описание си. в тексте.

2. Денситометрия электрофореграммы и запись протеино-граммы. Пропитанные глицерином бумажные электрофореграммы зажимают между двумя входящими в комплект денситометра стеклянными пластинками толщиной 1 мм. Для точного анализа очень важно, чтобы между пластинками и бумагой не осталось ни одного пузырька воздуха. Пузырьков можно легко избежать, если до закрепления электрофореграммы внутренние поверхности стеклянных пластинок покрыть тонким слоем глицерина. При закреплении электрофореграммы пластинки осторожно двигают относительно друг друга так, чтобы между ними и бумагой не осталось пузырьков воздуха. После этого их тщательно вытирают мягкой тканью и вставляют в соответствующее гнездо денситометра. Реагируя на изменение экстинкции, самописец прибора чертит кривую, весьма похожую на кривую Ти-зелиуса.

3. Количественная оценка протеинограммы. На протеинограмме каждая фракция представлена отдельной гауссовой кривой (фиг. 5). Площадь под кривой, соответствующей каждой фракции, можно измерить планиметрически или определить путем взвешивания на торзионных весах участка бумаги, вырезанного по ее контуру.

Для взвешивания всегда нужно вырезать полностью всю область, которую очерчивает гауссова кривая данной фракции. Так, например, после взвешивания участка бумаги, соответствующего альбумину, определяя вес участка, соответствующего а 4-глобулину, к нему следует прибавить участок, являющийся общим для областей этих двух фракций. Суммарный вес всех участков принимают за 100% и, исходя из него, рассчитывают процентное содержание каждой фракции.

При работе с автоматическими приборами обычно пользуются способами расчета, которые рекомендуют фирмы-изготовители.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Для пропитки электрофореграмм вместо глицерина можно применять следующие реактивы: смесь равных частей жидкого парафина и а i-бромнафталина (показатель преломления 1,5), бензиловый

спирт (показатель преломления 1,54), метиловый эфир салициловой

кислоты (показатель преломления 1,54).

Наиболее доступным реактивом все же является глицерин. Он особенно удобен для пропитки электрофореграмм, окрашенных для выявления гликопротеидов, но его нельзя применять в том случае, когда электрофореграммы окрашены кислым фуксином, так как он экстрагирует слишком много красителя из бумаги.

Недостаток парафин-бромнафталиновой смеси состоит в том, что при ее использовании бумага сохнет довольно медленно, а сама смесь раздражающе действует на слизистые оболочки.

2. Использование соответствующих светофильтров повышает точность работы денситометра. Следует применять красный светофильтр для денситометрии электрофореграмм, окрашенных синими красителями, и зеленый для электрофореграмм, окрашенных красными красителями. (Соответствующие рекомендации и другие сведения по эксплуатации обычно содержатся в руководстве к прибору.)

3. Величины процентного содержания фракций, определяемые денситометрией электрофореграмм, отличаются хорошей воспроизводимостью. Естественно, они в известной мере р

страница 27
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
взять напрокат ноутбук на месяц в москве
Компания Ренессанс лестница железная на второй этаж - всегда надежно, оперативно и качественно!
стул самба цена
боксы для хранени вещей в москве аренда

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)