химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

стки, занимаемые отдельными фракциями. На окрашенных и высушенных элек-трофореграммах те фракции, которые нужно элюировать, обводят карандашом. В местах, где граница между фракциями видна не четко, т. е. краситель не полностью удален из бумаги, соседние фракции делят по линии наименьшего окрашивания.

После разметки участки электрофореграммы, занимаемые каждой отдельной фракцией, вырезают. Чтобы элюирование было быстрым и достаточно полным, такой участок следует дополнительно разрезать на мелкие кусочки.

2. Элюирование. Соответственно числу фракций готовят ряд пробирок, в которые наливают по 3 мл раствора. Каждый участок электрофореграммы, соответствующий индивидуальной фракции, помещают в отдельную пробирку. Элюирование продолжается 2 ч при. комнатной температуре, причем пробирки необходимо периодически встряхивать. При щелочном элюировании полученные элюаты подкисляют 1 мл 0,1 н. НС1 и колориметрируют, определяя величину экстинкции при соответствующей длине волны.

В табл. 9 приведен состав элюирующих растворов, а также условия элюирования и колориметрии, рекомендуемые для использования в описанных методах.

Таблица 9

Условия элюирования и колориметрии при разных методах окрашивания

электрофореграмм

Краситель Элюирующий раствор Время элюн -рования. ч Длина волны при колориметрии, им

Амндовый черный 0,1 н. NaOH 0,5 595

Кислый фуксин 0,1 н. NaOH 2 570

ПунцоЕый красный 0,1 н. NaOH 2 550

Азокармин 0,1 н. NaOH 2 570

Бромфеноловый синий 50%-ный метанол, 0,5 550—600

содержащий 5%

NaX03

Когда определяемая фракция содержит значительное количество-белка (например, фракция альбумина при электрофорезе белков сыворотки), чтобы получить величины экстинкции, лежащие в пределах максимальной точности показаний прибора, объем элюирующега раствора следует увеличить до 6 мл.

3. Количественная оценка. Если учесть разведение и принять за 100% общую сумму величин экстинкции всех фракций, то можно рассчитать процентное содержание каждой фракции в исследуемом образце.

Примечания. 1. Анализ бумажных электрофореграмм методом элюирования весьма удобен для повседневной работы в клинических лабораториях. Он сравнительно прост, отличается быстротой получения результатов и их хорошей воспроизводимостью.

2. Рекомендуемые красители достаточно быстро окрашивают белковые фракции сыворотки и специфичны в отношении белков, т. е. не окрашивают других компонентов сыворотки. Однако различные белки окрашиваются по-разному. В связи с этим возможны артефакты, для устранения которых некоторые авторы предлагают вводить в количественный анализ электрофореграмм особые поправки: они должны привести в соответствие данные зонального и •свободного электрофореза.

Тем не менее при проведении повседневных клинических анализов и даже в исследовательской работе этими поправками можно пренебречь. Во-первых, расхождение показателей может зависеть не только от самих красителей, но и от различных моментов техники окрашивания, элюирования и т. д. В этом случае внесение поправки только частично исправит ошибку. Во-вторых, техника анализа в руках каждого исследователя со временем стандартизуется настолько, что получаемые результаты становятся сопоставимыми друг с другом, а это вполне удовлетворяет требованиям, предъявляемым к экспериментам в повседневной клинической работе. Если какие-либо особые причины все же заставляют вводить поправки, то их величину следует определить в конкретных условиях, принимая во внимание все особенности опыта. Такие поправки дадут более точные результаты, чем величины, просто заимствованные из литературы.

3. Удобно представлять полученные результаты графически на миллиметровой бумаге. Когда по оси абсцисс откладывают ширину каждой фракции, измеренную на окрашенной электрофореграмме, а по оси ординат наносят процентное содержание белка соответствующей фракции, расположение точек очень напоминает график, получаемый по методу Тизелиуса. Соединив эти точки кривой, мы можем построить таким образом протеинограмму сыворотки.

МЕТОД ЭЛЮИРОВАНИЯ РАВНЫХ ОТРЕЗКОВ ВСЕЙ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММЫ

Окрашенные и высушенные электрофореграммы разрезают поперек на отрезки шириной 1—3 мм, каждый отрезок по отдельности элю-ируют одним из способов, описанных в этом разделе, и колоримет-рируют. На графике откладывают по оси ординат величину экстинк-ции, а по оси абсцисс — положение данного отрезка на электрофореграмме (в мм). В сравнении с предыдущим этот метод дает более правильную кривую. Однако он весьма трудоемок и в конце концов не обеспечивает большей точности. Процентное содержание различных белковых фракций при элюировании равных отрезков электрофореграммы определяют на полученной кривой планиметрически.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ ФОТОЭЛЕКТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Принцип метода: с помощью особой пропитки увеличивают прозрачность бумажной электрофореграммы и в специальном приборе определяют экстинкцию ее последовательно расположенных участков.

ПРИБОРЫ

1. Вакуумный эксикатор. Обычный лабораторный эксикатор с кра

страница 26
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить готовую штукатурку короед
удаление сухой мозоли цена
где продаются наклейки на машину ученик осиорожно
megadeth концерт в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(28.06.2017)