химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

сусной кислоты и 80 мл дистиллированной воды.

3) Бромная вода.

4) 1%-ный водный раствор толуидинового синего.

5) 4%-ный раствор молибденовокислого аммония.

6) Ацетон.

Методика. Фиксированные нагреванием электрофореграммы на 15 мин погружат в свежеприготовленный реактив (1), затем на 15 мин переносят в бромную воду (3). После этого электрофореграммы ополаскивают водопроводной водой и на 30 мин погружают в окрашивающий раствор толуидинового синего (4). Затем окрашивающий раствор сливают и в течение 30—40 мин электрофореграммы промывают проточной водопроводной водой до полного удаления несвязавшегося красителя. Потом их фиксируют 3 мин в растворе (5) и на 15 мин погружают в дифференцирующий раствор (2). В результате на красновато-фиолетовом фоне отчетливо видны синие фракции глико-протеидов. Окрашивание завершается двухминутным погружением в ацетон и высушиванием на воздухе.

ОКРАШИВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ЙОДНОЙ КИСЛОТОЙ - РЕАКТИВОМ

ШИФФА [16]

Реактивы. 1) 1,2 г йодной кислоты растворяют в 30 мл дистиллированной воды, добавляют 15 мл 0,5 М раствора уксуснокислого натрия и 100 мл этанола. Реактив готовят непосредственно перед использованием.

2) 5,0 г йодистого калия и 5,0 г тиосульфата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды и добавляют 150 мл 96%-ного этанола и 2,5 мл 2н. соляной кислоты. Этот раствор также готовят непосредственно перед использованием.

3) 1,5 г основного фуксина растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,5 г метабисульфита калия и 3 мл концентрированной НС1. Раствор на 12 ч оставляют в холодильнике, затем смешивают его с 3—4 г угольного порошка и фильтруют через плотный бумажный фильтр. Фильтрацию повторяют до почти полного обесцвечивания фильтрата (допускается светло-розовый оттенок). Готовый раствор можно хранить 2—3 дня.

4) 0,4 г метабисульфита калия растворяют в 10 мл дистиллированной воды и добавляют 1 мл концентрированной НС1.

5) К 100 частям 40%-ного раствора формальдегида добавляют 3 части концентрированной НС1.

Методика. Фиксированные электрофореграммы да 10 мин погружают в реактив (1), а затем отмывают в 70%-ном этаноле. Потом их погружают на 8 мин в реактив (2) и снова отмывают в 70%-ном этаноле. Затем 30 мин их окрашивают реактивом (3) и трижды по 5 мин отмывают реактивом (4). После отмывки электрофореграммы на 2 мин погружают в 0,5 н. НС1 и на 20 мин помещают в реактив (5). В заключение их отмывают в течение 2 мин в ацетоне и высушивают на воздухе.

ОКРАШИВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ПО ЗЮДХОФУ [27]

Реактивы. 1) 1,0 г йодной кислоты растворяют в 30 мл дистиллированной воды и добавляют 70 мл абсолютного этанола.

2) 1,0 г парафуксина растворяют в 30 мл охлажденной 1 н. НС1, при встряхивании добавляют 1 г метабисульфита калия, растворенного в 170 мл дистиллированной воды и оставляют смесь на 48 ч. Затем раствор взбалтывают с порошкообразным углем и фильтруют.

Используемый парафуксин не должен содержать акридина. Не следует применять давно приготовленный метабисульфит калия. При нарушении герметичности упаковки верхний слой реактива нужно отбрасывать.

3) Раствор смеси формальдегида и аммиака. Смешивают равные объемы 1М фюрмальдегида и 1 н. гидроокиси аммония.

4) Дифференцирующие растворы: а) 96%-ный этанол и б) смесь этанол — 1 н. НС1 (5:3).

5) Диэтиловый эфир.

Методика. Электрофореграммы 10 мин обрабатывают реактивом (1), затем 10 мин промывают проточной водопроводной водой и на 2 мин погружают в дистиллированную воду. После этого их окрашивают реактивом (2) до тех пор, пока на бесцветном фоне не появятся красные зоны гликопротеидов. Как только фон электрофореграммы начнет розоветь, полоску следует быстро перенести в реактив (3), в котором она вся приобретет красный ивет. Примерно через 1—3 мин, когда окраска достигнет максимальной интенсивности, электрофореграммы на 5 мин погружают в реактив (4а), а затем в реактив (46), в котором происходит изменение цвета: гликопротеиды становятся красновато-л иловыми, а фон обесцвечивается. Несколькими сменами реактива (46) добиваются полного обесцвечивания фона. После этого, чтобы удалить НС1, электрофореграммы вновь промывают реактивом (4а). В заключение их погружают в эфир и высушивают на воздухе.

3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ПРИ НИЗКОВОЛЬТНОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ НА БУМАГЕ

Количественная оценка окрашенных белковых фракций, полученных при электрофорезе на бумаге, основывается на том, что для используемых красителей справедлив закон Ламберта — Бэра.

Существует два способа количественного определения красителей, связавшихся с белками: элюирование фракций из электрофореграммы и их колориметрическое измерение и прямая электрофотометрия неразрезанной полоски.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМ

ЭЛЮИРОВАНИЯ

ЭЛЮИРОВАНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ

Принцип метода. Вырезают участок бумажной электрофореграммы с каждой отдельной фракцией; сорбированный на этом участке краситель элюируют и определяют колориметрически.

Методика. /. Разрезание электрофореграммы на уча

страница 25
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
что означает цвет цветов в букете
Рекомендуем фирму Ренесанс - чердачный люк с лестницей купить- быстро, качественно, недорого!
кресло ch 838
храним ваши вещи

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)