химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ола отмывающим раствором может служить 0,5%-ная уксусная кислота.

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ ПУНЦОВЫМ КРАСНЫМ [24]

Окрашивающий раствор: насыщенный раствор пунцового красного 2R в смеси 50%-ный метанол — ледяная уксусная кислота (9:1).

Отмывающий раствор: смесь 50%-ный метанол — ледяная уксусная кислота (9:1).

Методика. Окрашивание продолжается 10 мин, затем электрофореграммы отмывают до полного удаления несвязавшегося красителя.

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ АЗОКАРМИНОМ [17]

Окрашивающий раствор: 0,25%-ный раствор азокармина в смеси метанол —- уксусная кислота (9:1).

Отмывающий раствор: смесь метанол — уксусная кислота (9:1).

Методика. Окрашивание продолжается 10 мин, затем электрофореграммы отмывают до полного удаления несвязавшегося красителя, каждые 15 мин меняя отмывающий раствор.

ОКРАШИВАНИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ

ОКРАШИВАНИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ СУДАНОМ ЧЕРНЫМ (МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ В НАШЕЙ ЛАБОРАТОРИИ)

Основной раствор красителя: 500 мг Судана черного 10В растворяют в 500 мл метанола.

Окрашивающий раствор: к 100 мл основного раствора красителя прибавляют 180 мл метанола и 120 мл дистиллированной воды.

Методика. Фиксированные нагреванием электрофореграммы на 60 мин погружают в окрашивающий раствор и затем отмывают в проточной водопроводной воде до полного удаления несвязавшегося красителя.

Основной и окрашивающий растворы следует хранить в темноте в плотно закупоренных бутылях и обязательно фильтровать через бумагу перед употреблением. Основной раствор лучше использовать не сразу после приготовления, а после того как он постоит 6—8 дней. Одну и ту же порцию окрашивающего раствора можно применять 4—5 раз. Затем происходит выпадение красителя в осадок, темно-синий оттенок раствора становится черным, и при фильтрации гранулы красителя остаются на фильтре.

Судан черный 10В окрашивает липопротеиды в синий цвет. Обычно фон, т. е. участки электрофореграммы, не содержащие липопро-теидов, не удается отмыть до абсолютно белого цвета, так как краситель нельзя полностью удалить из бумаги. Об этом не следует забывать при определении содержания липопротеидов методом элюиро-вания (см. стр. 60).

ОКРАШИВАНИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ СУДАНОМ ЧЕРНЫМ ПО СВАНУ [28]

Основной раствор красителя: 0,1 г чистого Судана черного растворяют в 100 мл 60%-ного этанола, подогревая на кипящей водяной бане. После охлаждения раствор красителя дважды фильтруют через мелкопористый бумажный фильтр.

Методика. Электрофореграммы на 3 ч погружают в окрашивающий раствор, затем отмывают в течение 45 мин в трех порциях 50%-ного этанола и высушивают на воздухе,

ОКРАШИВАНИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ ЖИРОВЫМ КРАСНЫМ (121

Окрашивающий раствор: 0,4 г чистого жирового красного растворяют в 1000 мл 60%-ного этанола, нагревая до кипения в колбе с обратным холодильником. Затем смесь оставляют на ночь при 30° С на магнитной мешалке. В заключение раствор фильтруют при 39° С.

Методика. Фиксированные нагреванием электрофореграммы на 18 ч погружают в окрашивающий раствор, нагретый до температуры 30° С, затем для удаления этанола в течение 2 мин промывают проточной водопроводной водой и высушивают при комнатной температуре. Окрашивание при температуре ниже 30° С приводит к выпадению красителя в осадок. Липопротеиды окрашиваются в красный цвет на розовом фоне.

ВЫЯВЛЕНИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ ЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО

ОКРАШЕННОЙ СЫВОРОТКИ [5]

К 1 мл сыворотки в вассермановской пробирке медленно прибавляют 0,1 мл насыщенного раствора ацетилированного Судана черного В в 95%-ном этаноле, тщательно перемешивают и оставляют

на 30 мин. Затем удаляют избыток этанола, продувая над сывороткой воздух. Во время окрашивания возможно выпадение осадка красителя, который легко удаляется центрифугированием.

8 мкл окрашенной сыворотки наносят на полоску фильтровальной бумаги и подвергают электрофорезу в буферном растворе Миха-элиса рН 8,6, JJ. = 0,05. Хорошо разделившиеся фракции а- ир-ли-попротеидов образуют зоны, окрашенные в синий цвет на белом фоне электрофореграммы.

Примечания. На бумаге Махери-Нагель 214 при напряжении 300 В в аппарате для зонального полумикроэлектрофореза можно полностью разделить липопротеиды за 1,5 ч.

А цетилирование судака черного 10В [193. К 60 мл пиридина добавляют 40 мл уксусного ангидрида. В эту смесь вносят 2,0 г судана черного 10В и оставляют на ночь. Затем дистиллированной водой доводят объем смеси до 3 л, собирают выпавший в осадок краситель, высушивают его и растворяют в ацетоне.

ОКРАШИВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ

Сывороточные гликопротеиды выявляются толуидиновым синим, который дает с ними метахроматическое окрашивание, или в цветной реакции с йодной кислотой и реактивом Шиффа (ШИК-реакция).

ОКРАШИВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ТОЛУИДИНОВЫМ СИНИМ [2]

Реактивы. 1) 1, 2 г йодной кислоты растворяют в 30 мл дистиллированной воды и добавляют 15 мл 0,5 М раствора уксуснокислого натрия и 100 мл 96%-ного этанола. Этот реактив следует готовить непосредственно перед употреблением.

2) Дифференцирующий раствор: к 100 мл метанола добавляют

20 мл ледяной ук

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
участки на новой риге от 100 км
стеллажи металлические
аскона банкетки каталог товаров
билеты на спектакль царь федор иоаннович театр русской драмы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.08.2017)