химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

себя зарекомендовали на практике следующие фирменные марки фильтровальной бумаги для электрофореза: Шляйхер-Шуль 2043а, Шляйхер-Шуль 2043b, Ватман 1, Ватман 4, Мунктель 20, Махери-Нагель 214.

АДСОРБЦИЯ БЕЛКОВ НА ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ БУМАГЕ

A. Во время электрофореза некоторые белки адсорбируются на

фильтровальной бумаге. Адсорбция белка бывает значительной при

кислом рН и низкой ионной силе раствора, но наблюдается также

и при рН 8,6. Адсорбция происходит в результате взаимодействия

положительно заряженных молекул белка и отрицательно заряженных волокон фильтровальной бумаги. Степень адсорбции разных

белков широко варьирует; например, липопротеиды сыворотки крови адсорбируются сильнее, чем сывороточный альбумин.

Б. В результате адсорбции некоторые мигрирующие белки связываются с бумагой, что приводит к образованию «хвостов».

B. Из-за образования «хвостов» белковые фракции, полученные

при электрофорезе, нельзя считать чистыми, так как они могут содержать следы других фракций. Образование «хвостов» снижает

точность количественной оценки электрофореграмм и значительно

затрудняет анализ малых количеств белка. В последнем случае

рекомендуется проводить электрофорез исследуемого белка в смеси

с другим белковым раствором. Например, можно смешать раствор

альбумина низкой концентрации с сывороткой и провести электрофорез этой смеси и отдельно сыворотки на двух соседних полосках.

Разница между содержанием альбумина на двух полосках будет соответствовать его концентрации в исследуемом растворе.

2. МЕТОДИКИ ОКРАШИВАНИЯ

Различные методики окрашивания фиксированных нагреванием электрофореграмм позволяют не только выявить, но и количественно измерить различные белковые фракции. Кроме методик окрашивания белка, существуют также способы окрашивания липидных и углеводных компонентов липопротеидов и гликопротеидов.

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ АМИДОВЫМ ЧЕРНЫМ

1) Очистка амидового черного [14]. 10,0 г чистого амидового черного растворяют в 900 мл дистиллированной воды, а затем осаждают, прибавив 100 мл концентрированной соляной кислоты. Надосадочную жидкость сливают, а осадок отмывают в 1000 мл 10%-ной НС1, после чего его помещают на фильтр и отмывают холодной дистиллированной водой до тех пор, пока в фильтрате не исчезнет голубое окрашивание. Затем осадок красителя переносят в химический стакан, суспендируют в дистиллированной воде и доводят рН суспензии до 6,5 с помощью NaOH. После этого нагревают до кипения, охлаждают и, проверив рН, высушивают на водяной бане. Из очищенного таким образом красителя готовят окрашивающий раствор.

2) Окрашивание по Грассману и Ханнигу [11] (см. стр. 48).

3) Окрашивание по методу Пукара [23]. Окрашивающий раствор:

1,0 г амидового черного растворяют в смеси 90 мл метанола и 10 мл

ледяной уксусной кислоты.

Отмывающий раствор'. 5%-ная уксусная кислота.

Методика. Фиксированные электрофореграммы сворачивают, на 2—3 мин погружают в нагреваемый на водяной бане до кипения метанол, а затем 4 мин окрашивают раствором амидового черного, имеющим температуру 80° С. После окрашивания полоски расправляют на стекле, оставляют на 5 мин и затем промывают в отмывающем растворе, нагретом до 80°С, пока не удалят избыток красителя.

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ КИСЛЫМ ФУКСИНОМ

Окрашивающий раствор: 2,0 г кислого фуксина растворяют в смеси, состоящей из 500 мл метанола, 400 мл дистиллированной воды и 10Э мл ледяной уксусной кислоты.

Дифференцирующий раствор: смешивают 500 мл метанола, 400 мл дистиллированной воды и 100 мл ледяной уксусной кислоты.

Отмывающий раствор: 10%-ная уксусная кислота.

Методика. Фиксированные нагреванием электрофореграммы на 15 мин погружают в окрашивающий раствор, а затем на 15 мин переносят в дифференцирующий раствор. После этого, каждые 20 мин меняя отмывающий раствор, электрофореграммы промывают до тех пор, пока участки бумаги, не содержащие белка, полностью не освободятся от красителя.

Возможность полного удаления не связывающегося с белком фуксина из бумаги является преимуществом этого метода, особенно удобного при количественном определении фракций с помощью элюирования (см. стр. 60). Одну и ту же порцию окрашивающего или дифференцирующего растворов можно использовать 4—5 раз. При первых отмывках новой серии электрофореграмм можно использовать последние порции отмывающего раствора из предыдущей процедуры окрашивания.

ОКРАШИВАНИЕ БЕЛКОВ БРОМФЕНОЛОВЫМ СИНИМ [3]

Окрашивающий раствор: 1%-ный раствор бромфенолового синего в этаноле, насыщенном HgCl2.

/ дифференцирующий раствор: метанол, содержащий 1% HgCl2-// дифференцирующий раствор: этанол, содержащий 1% HgCl2. Отмывающий раствор: метанол.

Методика. Фиксированные электрофореграммы на 5 мин погружают в окрашивающий раствор, переносят в I дифференцирующий раствор, а потом на 15 мин во II дифференцирующий раствор. После этого бумагу отмывают чистым метанолом. При необходимости можно очень быстро высушить электрофореграммы, погружая их в эфир и извлекая на воздух. Вместо метан

страница 23
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
мощные ноутбуки на прокат
Фирма Ренессанс: винтовые лестницы готовые - доставка, монтаж.
столик изо
хранение вещейв москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)