химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ругот друга. Между концами ветвей натягивают две платиновые проволочки толщиной ОД мм так, чтобы между ними остался зазор 0,5 — 1,0 мм. Капиллярной пипеткой заполняют пространство между проволочками исследуемым раствором и, перевернув вилку, быстрым движением прикасаются проволочками к поверхности смоченной лолоски бумаги.

НАПРЯЖЕНИЕ ПРИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ

А. В стандартных условиях опыта (те же самые бумага, буферный раствор и аппарат) миграция белков в электрическом поле зависит от напряжения.

Б. Обычно для фракционирования белков сыворотки используют рекомендованное выше напряжение 110 В, при котором разделение длится от 14 до 16 ч, и охлаждения не требуется. Для особых це--лей напряжение может быть увеличено, но, согласно закону Джоуля, при этом соответственно увеличится теплообразование. Выделение тепла можно уменьшить, если снизить ионную силу раствора. При достаточной влажности фильтровальной бумаги, на которой ведут электрофорез, и не очень высокой температуре окружающего воздуха можно повысить напряжение на полоске до 250—300 В, не принимая специальных мер для охлаждения. Однако при дальнейшем увеличении напряжения требуются специальные приспособления для охлаждения.

НЕКОТОРЫЕ ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

А. Электроосмос. При прохождении электрического тока в капиллярной системе (фильтровальная бумага), заполненной буферным раствором, наблюдается явление электроосмоса, т. е. движение буферного раствора к катоду навстречу миграции белков.

Б. Факторы, влияющие на перетекание буферного раствора:

1) После погружения концов полоски влажной фильтровальной

бумаги в буферный раствор, заполняющий отсеки электрофорети?ческого аппарата, начинается перетекание этого раствора из отсека

в отсек по смоченным полоскам, которое продолжается от 30 до

60 мин, пока не наступит равновесие. Если полоски бумаги были

предварительно хорошо смочены, то период уравновешивания может

быть короче.

Чтобы полностью устранить влияние этого процесса на разделение белков, следует уложить смоченные буферным раствором полоски бумаги на рамку, поместить их в электрофоретическую камеру и закрыть крышку. Только после того как равновесие установится, т. е. примерно через 30 мин, можно наносить исследуемый образец.

2) Возникающее по закону Джоуля тепло увеличивает испарение буферного раствора с поверхности бумаги. Испарение приводит к концентрированию буферного раствора, увеличение ионной силы повышает его удельную электропроводность, а это в свою очередь опять-таки ведет к нагреванию и испарению раствора. Испарившийся буферный раствор восполняется раствором из отсеков аппарата, поступающим благодаря капиллярным силам, т. е. начинается движение раствора по направлению от концов полоски к ее центру. На одном конце полоски направление этого потока совпадает с миграцией белков, а на другом конце увлекает их в противоположную сторону.

Нежелательные эффекты и интенсивность этих противоположно направленных потоков в принципе минимальны, так как в герметизированном приборе для электрофореза быстро создаются условия влажной камеры. Кроме того, конструкция некоторых аппаратов для электрофореза предусматривает впускной штуцер для введения пара в электрофоретическую камеру, что позволяет начать электрофорез в насыщенной паром атмосфере.

В результате испарения буферного раствора на внутренней поверхности стеклянной крышки, закрывающей электрофоретическую камеру, происходит конденсация воды и образование капель. Опасности попадания капель воды на электрофореграмму во время опыта или при удалении крышки можно легко избежать, если внутреннюю поверхность крышки покрыть листом фильтровальной бумаги.

3) Если заполняющий отсеки электрофоретической камеры буферный раствор находится на разных уровнях, то из отсека с более

высоким уровнем он перетекает по бумажным полоскам в отсек с более

низким уровнем. Этот поток буферного раствора в зависимости от

направления может либо тормозить, либо ускорять миграцию белков.

Чтобы избежать перетекания, следует тщательно выравнивать уровни буферного раствора во всех отсеках электрофоретической камеры до внесения в нее бумажных полосок. Обычно отсеки приборов для электрофореза снабжены отводными кранами, которые соединяются резиновым шлангом. После заполнения прибора буферным раствором отводные краны открывают (или, если кранов нет, снимают зажим с соединяющего отсеки резинового шланга), и происходит выравнивание уровней.

Еще проще добиться одинаковых уровней с помощью Т- или Y-образной трубки, имеющей на концах резиновые шланги и заполненной буферным раствором. Два ее конца погружают в буферные отсеки электрофоретической камеры, а через третий отвод насасывают буферный раствор. Когда раствор заполнит трубку, этот отвод перекрывают зажимом.

4) Прежде чем начинать работу с данным прибором для электрофореза, следует эмпирически установить, в какое место бумажной

полоски нужно наносить исследуемый образец, чтобы получать наилучшее разделение.

ВЫБОР ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ БУМАГИ

Хорошо

страница 22
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить коттедж новорижское шоссе
заказ автомобиля на свадьбу
основание vacancy нужен дополнительный матрас?
купить садовые качели в интернет магазине недорого

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.07.2017)