химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют отстаиваться на ночь; на следующий день ее фильтруют. Одна и та же порция красителя может быть использована несколько раз.

Отмывающий раствор: уксусная кислота — метанол (1:9).

Методика окрашивания. Сосуд для окрашивания заполняют раствором красителя и погружают в него бумажные электрофоре-граммы, фиксированные нагреванием. Окрашивание проводят в течение 10 мин при постоянном перемешивании, затем раствор красителя заменяют на отмывающий раствор. В течение примерно 4 ч несколько раз производят смену раствора до тех пор, пока свежая его порция не останется бесцветной.

ПРИМЕЧАНИЯ

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ КАМЕРА

Кроме прибора Грассмана — Ханнига, применяются также элек-трофоретические камеры других типов. Схемы двух из них представлены на фиг. 2 и 3.

А. Камера Даррема [6]. Этот прибор удобен для серийных ана~ лизов (фиг. 2).

Б. Камера Канкеля — Тизелиуса 118]. В этом приборе полоски бумаги для электрофореза помещаются между двумя силикониро-ванными пластмассовыми пластинами, которые устраняют нежелательное испарение буферного раствора, что препятствует изменению его концентрации. Кроме того, этот прибор пригоден и для двумерного электрофореза (фиг. 3).

В. Камера «Элфор» (Bender-Hobein, ФРГ). Пластмассовая камера «Элфор» широко используется для повседневной работы в клинических лабораториях. Прибор обеспечивает постоянную величину рН в ходе электрофореза. Этому способствует специально подобранное соотношение объемов электродных и аналитической камер, юсобый способ укладки бумажных полосок и оригинальное лабиринтное устройство вокруг электродов. Укладка бумажных полосок .производится очень просто: они сами прилипают ко всей поверхности поддерживающего съемного мостика.

БУФЕРНЫЕ РАСТВОРЫ

A. Буферные растворы, которые используются'для электрофореза сывороточных белков, должны иметь рН между 8,0 и 9,0.

Именно при этих значениях рН белки мигрируют к аноду (изоэлектрические точки разных белков сыворотки находятся в диапазоне

рН от 4,7 до 7,0).

Б. Ионная сила буферных растворов должна быть в пределах 0,06—0,1^. Разбавленные растворы с ионной силой ниже 0,06^ не обладают достаточной буферной емкостью и не обеспечивают четкого разделения белковых фракций.

B. С практической точки зрения важно отметить, что, повышая

.напряжение при электрофорезе, можно работать с растворами низкой ионной силы. Это снизит теплообразование под влиянием

электрического тока, но разделение белков будет не очень четким. При повышении ионной силы разделение проходит гораздо

.лучше.

Г. Помимо указанных выше буферных растворов, для электрофореза белков и пептидов можно использовать следующие:

1) Буферный раствор барбитурат натрия—барбитуровая кислота: 10,3 г барбитурата натрия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и прибавляют 1,84 г барбитуровой кислоты, также растворенной в 1000 мл дистиллированной воды; при этом получается буферный раствор рН 8,6, [А = 0,06.

2) Буферный раствор барбитурат натрия — уксуснокислый, натрий: 7,36 г барбитурата Na и 3,86 г CH3COONa-3H20 растворяют в 1100 мл дистиллированной воды; рН 9,0, JJ. = 0,06.

3) Боратный буферный раствор: 8,8 г борнокислого натрия и: 4,05 г борной кислоты растворяют в 1000 мл дистиллированной воды; рН 8,6.

4) Буферный раствор трис—ЭДТА [1]. Этот раствор лучше других подходит для разделения белков сыворотки. В нем можно выделить 9 фракций: преальбумин, альбумин, три фракции а-глобулинов, три фракции р-глобулинов и у-глобулин.

Приготовление буферного раствора. 60,5 г три(оксиметиламино-метана (трис), 6,0 г ЭДТА и 4,6 г борной кислоты растворяют в дистиллированной воде и доводят до конечного объема 1000 мл. Моляр-ности растворенных веществ соответственно составляют 0,5; 0,021 и 0,075 М, а рН равен 8,9.

Д. Буферные растворы легко прорастают плесневой или бактериальной флорой. Следует тщательно избегать бактериального загрязнения и не применять проросшие растворы.

Е. Буферные растворы следует хранить в холодильнике. Нецелесообразно запасаться готовыми растворами в объеме, превышающем недельную потребность, так как срок их хранения не более 8—10 дней. После каждого сеанса электрофореза необходимо сменить полюса либо тщательно перемешать в бутыли буферные растворы из анодного и катодного отсека и вновь залить в аппарат. Даже выполняя это требование, не следует использовать одну и ту же-порцию буферного раствора более 3—4 раз.

НАНЕСЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМОГО ОБРАЗЦА

Ниже описаны два весьма удобных способа нанесения анализируемого образца на полоску фильтровальной бумаги.

А. Капиллярной пипеткой исследуемый раствор белка переносят на шлифованный край предметного стекла, затем быстрым движением прикладывают этот край стекла к полоске бумаги и держат До тех пор, пока весь раствор не впитается в бумагу. С помощью^ предметного стекла шириной 2,5 см можно нанести 0,05 мл исследуемого раствора.

Б. Из плексигласа или другого подходящего пластика изготовляют U-образную вилку, ветви которой на 6—8 см расходятся д

страница 21
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
раствор для скрепления кирпичной кладки
Фирма Ренессанс: коврики для ступеней лестницы купить в интернет магазине - продажа, доставка, монтаж.
спектакль амстердам
офисные кресла купить в москве дешево

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.09.2017)