химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ип метода. Компоненты белковой смеси, нанесенные на специальную фильтровальную бумагу, смоченную буферным раствором, мигрируют в электрическом поле в направлении и со скоростью,, зависящими от заряда их молекул. В результате смесь делится-^на фракции, которые можно выявить специальными методами окрашивания и измерить количественно.

Область применения: качественный и количественный анализ-белковых смесей; качественный и количественный анализ белков сыворотки, мочи, спинномозговой и тканевой жидкостей.

1. ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

ОБОРУДОВАНИЕ

Аппарат для электрофореза. Схема электрофоретического аппарата представлена на фиг. 1. Он состоит из пластмассовой камеры с плотно прилегающей стеклянной крышкой /. Обе электродные камеры перегородкой из пластика 2 разделены на два отсека. В наружных отсеках 3 расположены платиновые электроды диа-метром0,5—0,8 мм. В каждый из двух внутренних отсеков погружаются концы фильтровальной бумаги 4. В середине перегородки, которая разделяет наружный и внутренний отсеки электродной камеры, на высоте 40 мм расположено соединяющее их отверстие. Это отверстие (0,5 см в диаметре) неплотно закрыто стеклянной ватой,

В электрофоретической камере находится съемная пластмассовая рамка 5, на которую укладываются полоски фильтровальной бумаги.

Источник тока. Стабилизированный источник питания дает постоянный ток 100 мА и напряжение до 300 В.

Сосуд для окрашивания. Окрашивание полосок фильтровальной бумаги проводят в стеклянном сосуде с крышкой размером 7 X 38 см.

ПРОВЕДЕНИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

1. Приготовление буферного раствора. 29, 43 г веронала и 19,43 г CHgCOONa • ЗН20 растворяют примерно в 1 л дистиллированной воды, затем прибавляют 180 мл 0,1 н. НС1 и дистиллированной водой доводят объем до 3 л. Буферный раствор должен иметь рН 8,6.

2. Заполнение электрофоретшеской камеры буферным раствором. В каждый отсек электрофоретической камеры заливают примерно по 500 мл буферного раствора. Во всех отсеках аппарата буферный раствор должен достигать одного и того же уровня.

3. Смачивание полосок фильтровальной бумаги буферным раствором. Перед смачиванием на полоске фильтровальной бумаги карандашом отмечают место, соответствующее концу рамки и место нанесения образца. После этого бумажные полоски равномерным движением погружают и проводят через буферный раствор, заполняющий стеклянный сосуд. Для погружения концы полоски берут пинцетами, правый конец погружают в буферный раствор, а затем медленно вытягивают его наверх, постепенно погружая в раствор левый конец полоски. Полоску нужно продвигать со скоростью, с которой происходит ее смачивание буферным раствором. После смачивания полоску извлекают из буферного раствора в вертикальном положении и некоторое время ждут, пока стекут последние капли. Затем полоску с обеих сторон промокают несколькими слоями фильтровальной бумаги, лишь слегка прикасаясь к ней, чтобы не выдавить влагу. Мокрые полоски укладывают на рамку согласно ранее сделанным отметкам.

4. Нанесение исследуемого материала (сыворотки). На отмеченную стартовую линию смоченной полоски пипеткой наносят 0,01 мл

нормальной сыворотки, содержащей 5,6—8% белка.

Способ нанесения сыворотки. Анализируемый материал наносят пипеткой поперек полоски, на 3 мм отступая от каждого ее края. Для этого пипетку медленно и равномерно передвигают по стартовой линии, слегка прикасаясь кончиком к бумаге. Кончик пипетки должен быть гладким, чтобы не поцарапать бумагу; осторожного прикосновения к бумаге вполне достаточно для того, чтобы исследуемый материал впитался.

5. Электрофорез. Полоску фильтровальной бумаги кладут на рамку в электрофоретической камере таким образом, чтобы оба ее конца, выходящие за рамку, были погружены в буферный раствор (фиг. 1). После укладывания полосок камеру закрывают стеклянной крышкой и аппарат включают в электросеть. Электрофорез продолжается от 12 до 16 ч при 110 В и силе тока около 1 мА на полоску.

6. Извлечение и высушивание бумажных электрофореграмм. Когда закончится разделение фракций, электрический ток выключают и осторожно поднимают стеклянную крышку аппарата. Нужно следить, чтобы скопившийся на внутренней поверхности крышки конденсат не попал на полоски бумаги. Рамку с полосками извлекают из электрофоретической камеры и помещают в проволочную корзинку так, чтобы концы полосок, ранее лежавшие у края рамки, теперь располагались бы на краях корзинки. Затем корзинку с полосками ставят в сушильный шкаф с температурой 110° С до тех пор, пока не высохнет бумага. При этой температуре белки денатурируют и фиксируются на бумаге.

7. Окрашивание бумажных электрофореграмм. Разделенные при электрофсрезе белковые фракции выявляют на бумажных полосках с помощью окрашивания амидовым черным.

Окрашивающий раствор. Готовят насыщенный на холоду раствор амидового черного в растворителе, содержащем смесь ледяная уксусная кислота — метанол (1:9). Для этого примерно 13,0 г амидового черного растворяют в 100 мл уксусной кислоты и прибавляют 900 мл метанола. Смесь

страница 20
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
не работает холодильная камера на холодильнике електрлюкс
производство лайтбоксов, менюбордов спб
bfmv 6
модуль управления acm-c2kr306 цена

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.07.2017)